Как промыть колонку в домашних условиях: Простой способ очистки газовой колонки от накипи.

Разное
alexxlab

Содержание

Простой способ очистки газовой колонки от накипи.

Самый простой способ очистки газовой колонки от накипи.

Сразу хочется оговориться в статье идет речь именно о очистке проточной части водонагревателя от накипи. При этом предупреждаем, вмешиваться в работу газовой части колонки мы категорически не рекомендуем. Газом должны заниматься газовики. Иначе из-за малейшей оплошности можно наделать больших бед.

Самой распространенной неисправностью  газовых проточных нагревателей или газовых колонок считается зарастание водонагревателя накипью, скопившейся в теплообменнике.

От чего забивается накипью теплообменник.

Как понять, нужно ли вам  чистить теплообменник или нет, и от чего он забивается. В  зарастании трубок проточного водонагревателя накипью виноваты, как правило, вы сами и только отчасти жесткая вода. Почему Вы сами, ведь все кругом только и делают, что ругают жесткую воду.

Все дело в том, что отложение накипи начинается при температуре воды свыше 80 градусов. Если быть точным, 78 градусов еще отложений нет, а при 82 начинаются интенсивные отложения накипи. А зачем спрашивается Вам такая температура? Для купания температура свыше 42 градусов не нужна, для удаления жиров 45 градусов достаточно, средства для удаления жира справляются с ним и в холодной воде. Для стирки больше 60 градусов не нужно, но сейчас в основном стирают стиральные машинки — автоматы.

Делайте выводы сами. Очень многие оставляют

работать газовую колонку на запальнике, несомненно, удобно, нет необходимости разжигать и настраивать ее каждый раз, пламя на запальнике небольшое, но если вы его рассверлили для надежности, то хватает и часа, чтобы температура в теплообменнике нагревателя поднялась до 90 градусов, вот вам и накипь. И третья наша ошибка это работа газовой колонки при малом расходе воды – читайте низком давлении воды в водопроводе. Конечно, проточный водонагреватель в штатном режиме работать при слабом давлении не может. Но русские умельцы и «черта на масленицу заставят блины печь». Где нужно подкрутим, запальник рассверлим, на выходе редуктора подложим шайбочку и вооля, вода еле идет, а колонка горит и при этом даже кипяток с паром выбрасывает. Вот вам и ваша накипь.

Выводы:

Чтобы накипь в колонке не образовывалась, не ленитесь ее отключать и включать по необходимости, если не хотите, пользуйтесь электрическим проточным нагревателем или двухконтурным котлом, рассчитанным на производство горячей воды. И не правда, что котлы хуже греют воду, лично у меня самый обыкновенный, дешевый двухконтурный котел «Житомир» обеспечивает горячей водой без проблем две ванных комнаты и душ.

Не переделывайте автоматику проточного нагревателя, если у вас слабый напор, лучше поставьте повысительный насос, их сейчас выпускают очень много, всегда можно подобрать подходящий именно вам.

При включении газовой колонки в работу отрегулируйте расход воды по температуре, крутой кипяток не нужен, скажите, зачем разбавлять горячую воду холодной, если мы сейчас одинаково платим и за ту и за другую.

Когда необходимо промывать змеевик (теплообменник) газовой колонки.

Теплообменник газовой колонки.

Ну а теперь, если у нас уже случилась беда, давайте займемся промывкой теплообменника. А понять, что теплообменник газовой колонки забит можно по следующим симптомам:

низкий напор в кране горячей воды при хорошем напоре в кране с холодной водой, при этом колонка либо вообще не включается, либо включается и тут же выключается.

Конечно, может еще сломаться кран на входе в колонку, поэтому для начала проверьте его, и только потом разбирайте газовую колонку.

Убедились, что кран исправен, можно приступать к разборке водогрейной колонки.

Как разобрать теплообменник колонки. Инструменты для работы.

 Описывать весь процесс разборки я думаю, не стоит. Главное убедитесь, что у вас имеется необходимый инструмент. Это в минимальном наборе ключ «Бако» или трубный №1, ключ разводной, отвертки — крестовая и плоская минимум №5, комплект запасных паранитовых прокладок.

 Еще вам понадобится сантиметров 60 резинового шланга ? дюйма с металлическим хомутом. В некоторых колонка трубка может быть больше, поэтому убедитесь в ее толщине сами. И конечно заранее приобретите в хозмаге антинакипин, продается в виде сухого порошка, разводится горячей водой. Если повезет, можете найти там же, в пластмассовой бутылочке. Берите лучше 2 шт, чтобы хватило на два раза.

Антинакипин

Для начала снимаем с котла фурнитуру – ручки и т.д. Затем кожух. Сняли кожух, определитесь с трубками подвода воды, чтобы случайно не тронуть газ.

Обычно далее все рекомендуют снимать теплообменник и промывать его вне колонки. Мы же поступим иначе.

Промывка колонки  от накипи.

После того как сняли кожух с газовой колонки, перекрываем подачу воды на входе и открываем любой из кранов горячей воды поближе к колонке. Далее от теплообменника проточного водонагревателя откручиваем подающую трубку

, и отводим её немного в сторону. Теплообменник медный и трубка нам позволит это сделать без труда. Как только вы открутите с теплообменника гайку, вода из теплообменника начнет уходить — кран открыт, воды сливаем немного, примерно литр. Если быть точным можете найти в паспорте колонки объем воды в теплообменнике и слить чуть больше.

Далее поступаем так: одеваем шланг на вход теплообменника, поднимаем его повыше колонки, в шланг вставляем воронку и в нее тонкой струйкой вливаем приготовленный раствор. Лейте потихоньку, иначе может начаться реакция, и раствор вытолкнет назад. В растворе присутствует соляная кислоты, она может привести к ожогам. Особенно оберегайте глаза.

Раствор антинакипина должен остаться в теплообменнике на пару часов. Если вы не отключали газ, а мы вам это не рекомендовали делать, можно прогревать раствор на горящем запальнике. Реакция пойдет быстрее, времени потребуется меньше.

Под кран подставьте пластмассовое ведро или тазик, и открываете подачу воды в колонку. Только потихоньку. Посмотрите, что выходит из шланга. Если шлама много и напор после промывки неплохой, значит, все прошло удачно, если нет, повторите всю процедуру промывки еще раз. Но в случае применения антинакипина, это вам врятли придется делать. Если вы не нашли антинакипин, можно использовать 100-граммовую упаковку лимонной кислоты, растворив ее предварительно в 500 мл воды. Говорят, что неплохо удается промывка девяти процентным уксусом. Но мы, честно говоря, другие растворы не пробовали.

Все дело в том, что в газовой колонке есть кроме теплообменника и другие детали. Сам теплообменник медный и ему ничего не будет, а вот так называемый редуктор обычно алюминиевый, вы его можете испортить. Поэтому если не найдете антинакипин, с другими растворами по нашей технологии не экспериментируйте, лучше снимите теплообменники и промойте его отдельно.

От чего забивается накипью теплообменник?

Конечно, при полной разборке теплообменника газовой колонки придется сделать много лишней работы, но так вы его точно не испортите. Промывать проточную часть водонагревателя газовой колонки можно и другими растворами, мне например, рассказывали, что неплохо отмывает накипь Пепси Кола, так что если есть желание, экспериментируйте, особенно если у вас свой дом и имеется возможность использовать бытовой антифриз. Удачи!

хотите сделать сами? — BWT

Если вы владелец газовой колонки, то рано или поздно перед вами встаёт вопрос: «Почему она стала хуже греть и куда делся напор?». С вероятностью в 99% дело в накипи, которая образуется внутри теплообменника.

Качество работы вашей отопительной системы напрямую зависит от того, насколько загрязнена колонка. При постоянной циркуляции и прогреве жидкости образуются осаждения в виде окалины и накипи, которые препятствуют теплообмену и прохождению водяного потока.

Ответом на эти проблемы становится промывка теплообменника газовой колонки, которую можно поручить специалисту, или, имея минимальные технические навыки, провести самостоятельно. Производители отопительного оборудования советуют проводить подобную процедуру не реже раза в год. Хотя многое зависит от качества воды в вашем районе.

Решения BWT для очистки теплообменников:

Кстати, один из показателей того, что пора заняться очисткой — это цвет пламени. Если пламя становится коптящим и желтым, оттягивать момент чистки теплообменников газовой колонки просто опасно.

Если вы все же решили провести очистку самостоятельно, то стоит придерживаться нескольких простых правил:

  1. Отключите газ.
  2. Проверьте, что газ отключен. (Проверьте отсутствие запаха газа, не подвергайтесь лишнему риску).
  3. Отсоедините управляющий прибор.
  4. Открутите трубы для подачи.
  5. Снимите колонку с петель и поставьте ее на ровную поверхность вверх дном.
  6. С помощью шприца или резиновой груши влейте внутрь жидкость для очистки(на них мы остановимся отдельно).
  7. Оставьте на пару часов.

После того как пройдет необходимое время соберите все в обратном порядке. То есть повесьте колонку на место, установите прибор, подключите трубу, по которой подается вода, и поставьте под газовую колонку ведро, или любую другую тару для сбора промывочной воды.

После этого постепенно включите подачу, и промывайте, пока вода не станет чистой. Это может занять какое-то время, в зависимости от загрязненности. Как правило хватает нескольких минут.

После того, как вода очистилась, можно подключить остальные шланги.

Желательно именно сейчас проверить, все ли подключено надежно. Теперь можно включить подачу газа на несколько минут. Выключить газ и, убедившись что запаха нет, включить снова.

Вот и финиш — можно наслаждаться горячей водой с нормальным напором.

Возвращаясь к вопросу о жидкостях для промывки теплообменников газовых колонок, стоит сразу же сказать, что лучше взять специально предназначенное средство для очистки теплообменников. Однако не имея его под рукой, можно воспользоваться уксусом или лимонной кислотой. В интернете встречается много советов по промывке соляной кислотой. Запомните — промывка соляной кислотой может привести к порче вашего оборудования. Если уксус приводит к безопасной реакции уксусной декальцинации, то более сильные кислоты могут повредить внутренние поверхности теплообменника. Если вы решили воспользоваться для промывки лимонной кислотой, то идеальными пропорциями станут 200-250 грамм на 5 литров воды.

Так же во время чистки колонки, раз уж она уже разобрана, стоит уделить внимание газовым соплам. Там образуется сажа от сгорания и он могут забиваться, в следствии чего пламя начинает гореть не равномерно и теряется эффективность нагрева.

Если же вы пригласили мастера для промывки теплообменника газовой колонки, то попросите его почистить и газовые форсунки. Если же вы чистите их самостоятельно — то достаточно снять крышку с газовой колонки и собрать сажу и грязь пылесосом. Для лучшего эффекта можно взять мягкую кисточку и под пылесос пройтись по внутренним поверхностям.

Как видно — в процессе очистки и промывки теплообменников газовых колонок нет ничего сложного. Достаточно иметь пару часов времени и уметь открутить пару вентилей. Но все же если есть возможность поручить работу профессионалу, лучше поступить именно так. Специалист сделает все то же самое, только быстрее, с гарантией и с применение средств, специально разработанных для чистки и промывки газовых колонок.

И нельзя не сказать, что самым эффективным методом борьбы с накипью и загрязнением является недопускание ее появления. На сегодняшний день существует огромный выбор фильтров, средств для очистки теплообменников и намагничивателей для отопительных систем, которые обеспечат нормальную работу на долгое время. Гораздо удобнее раз в два года поменять наполнитель фильтра, чем каждый год возиться с промывкой.


Как почистить газовую колонку: от накипи, копоти

Использование газовой колонки для нагрева воды — один из популярных вариантов в частном секторе при отсутствии магистрали горячего водоснабжения, при ее эксплуатации необходимо периодически проводить работы по обслуживанию для повышения срока службы и эффективности работы агрегата. Для этого необходимо знать, как почистить газовую колонку от накипи, сажи, образующейся в результате сгорания газа, и пыли, которая в большом количестве оседает при эксплуатации на поверхность агрегата.

Основной узел газовой колонки, который нуждается в обслуживании — теплообменник, представляющий собой камеру с радиаторными пластинами, нагреваемыми газовой горелкой, и трубопровод с циркулирующей подогреваемой водой. Так как накипь образуется внутри трубопровода, имеющего неразборную конструкцию, основным методом его очистки являются химические вещества, внешнюю поверхность от сажи очищают механическими или химическими методами с использованием бытовых моющих средств.

Колонка в работе

Почему образуется накипь в колонке

Природная питьевая вода содержит некоторое количество минеральных солей калия, марганца, магния, железа, находящихся в ней в растворенном состоянии из-за того, что соединения имеет низкую валентность. Станции водоочистки, поставляющие воду потребителю, в основном занимаются ее обеззараживанием, избавление от солей (умягчение) воды является дорогостоящей процедурой и если их содержание не превышает предельно допустимых норм, понижение концентрации солей не проводят.

При повышении температуры воды происходит химическая реакция с разложением солей на составляющие, одной из которых является нерастворимый оксид более высокой валентности. Процесс можно рассмотреть на примере, где двухвалентный бикарбонат кальция при нагревании преобразуется в трехвалентный карбонат кальция и угольную кислоту, последняя, являясь нестойким соединением, распадается на воду и углекислый газ:

Ca(НСО3)2 ——> СаСО3 + Н2СО3.

Н2СО3 —-> Н2О + СО2.

Углекислый газ плохо растворяется в воде, с увеличением температуры этот показатель падает, поэтому в открытом резервуаре он в форме пузырьков выталкивается из воды и поступает в атмосферу, а в замкнутом контуре газ аэрирует воду.

Химический процесс образования накипи
Влияние температуры на образование накипи

Установлено, что отложение солей при возрастании температуры воды на 10 °С ускоряется в 2 — 3 раза, к примеру, если сравнить воду с температурой 40 и 80 °С, то в последней накипь образуется в 6 — 8 раз быстрее.

Исходя из приведенных фактов, некоторые пользователи предполагают, что если понизить температуру нагреваемой воды к примеру до 50 °С, можно полностью избавиться или существенно уменьшить количество оседающей накипи. Это не совсем правильно, ведь при нагревании природным газом поверхность теплообменника имеет очень высокую температуру, сопоставимую с пламенем газовой горелки (800 — 1000 °С), и в месте соприкосновения внутренних стенок трубопровода с водой накипь будет появляться с одинаковой скоростью независимо от ее общего состояния.

Таким образом, понижение температуры нагреваемой воды замедлит образование накипи, но не предотвратит его полностью из-за того, что наружная часть проходящего водного потока будет довольно сильно разогреваться.

Принцип работы колонки

Зачем чистить колонку

Необходимость очистки колонки от грязи и в первую очередь от накипи ни у кого не вызывает сомнений по следующим причинам:

  • Отложение солей на внутренних стенках теплообменика снижает эффективность теплопередачи — в результате происходит значительный перерасход энергоресурсов.
  • Из-за большего времени нагревания воды в засоренной системе происходит перегрев пластин теплообменника и соответственно снижается срок его службы.
  • Накипь забивает проходной канал теплообменного трубопровода, снижая при этом объем вытекающей горячей воды в единицу времени — это вызывает неудобства при мытье посуды, принятии водных процедур.
  • Отслоившиеся частицы нерастворимых оксидов засоряют клапаны, аэраторы смесительных кранов и прочие узлы системы, вызывая необходимость частого ремонта оборудования.
  • Копоть, образующаяся на пластинах теплообменника, снижает КПД его работы, препятствуя обмену теплом с пламенем горелки.

Читайте также: Какая газовая колонка лучше — выбор обородования.

Основные узлы водонагревателя

Когда пора чистить агрегат

Чтобы предотвратить преждевременный выход колонки из строя, сэкономить энергоресурсы, и в то же время не заниматься бесполезной тратой времени на разборку водонагревательного агрегата и проведение очистных процедур, следует знать признаки, когда необходима чистка газовой колонки от накипи и копоти. Основными показателями являются следующие факторы:

  • Объем поступающей из смесителя горячей воды существенно уступает холодной, это можно заметить по более тонкой струе, выходящей из крана.
  • Водонагревательный аппарат выставлен на максимальную мощность нагрева, газовые конфорки функционируют в предельном режиме, но вода медленно нагревается и никогда не достигает верхнего температурного порога.
  • Колонка при открывании крана смесителя не запускается или после работы в течение короткого времени снова отключается.

Перечисленные признаки являются прямым указанием на то, что колонку необходимо чистить, так образование копоти не столь критично сказывается на работе агрегата, ее удаляют во время проведения очистных работ снятого теплообменного змеевика.

Теплообменники

Способы удаления накипи

Так как накипь образуется в неразборном трубчатом змеевике теплообменника, единственным вариантом для ее удаления в бытовых условиях является использование химических средств, не оказывающих вредного воздействия на материал его изготовления. На рынке водонагревательного оборудования представлены два вида теплообменных камер: из меди (популярные марки Zanussi GWH, Electrolux GWH, Hyundai H-GW, Oasis Glass, Termet AquaHeat, Electrolux NanoPlus, Bosch Junkers WR, Neva 4510,) и нержавеющей стали (известные бренды Vaillant Mag, Beretta Idrabagno Aqua, Gorenje GWH).

Медь отличается более высокой теплопроводностью (это позволяет снизить расходы на энергоресурсы), ее цена выше нержавейки, недостатком является невысокий срок службы около 12 лет. Нержавейка хуже передает тепло, устанавливается в бюджетные модели водонагревательных установок отечественного и китайского производства, изредка встречается и в дорогих агрегатах европейских поставщиков, срок ее службы достигает 20 лет. Оба металла не подвержены коррозионному воздействию воды и имеют приблизительно одинаковую химическую устойчивость, поэтому для очистки тепловых обменников из нержавейки и меди используют сходные методы и материалы.

Препараты для ликвидации накипи

Химические реагенты для растворения накипи

Обычно очистку теплообменника колонки проводят в среднем раз в 1 год, периодичность проведения работ зависит от продолжительности функционирования водонагревательного агрегата, жесткости воды, наличия дополнительных фильтров, и может колебаться в пределах от 6 месяцев до 3 лет.

Очищать теплообменник от накипи можно в статическом режиме без извлечения его из корпуса колонки и в динамическом, когда его одновременно отмывают от сажи, для проведения работ используют следующие реагенты:

Антинакипины. В торговой сети реализуется широкий ряд средств бытовой химии для борьбы с накипью, известностью пользуются Антинакипин, Detex, Master Boiler, Cillit Bang, в принципе можно использовать любое вещество из огромного ряда выпускаемых марок для очистки бытовых чайников, утюгов, водонагревательных приборов, бытовых стиральных и посудомоечных машин. Если средство реализуется в виде концентрата, его разбавляют водой в необходимой пропорции перед заливкой в теплообменник.

Соляная кислота HCl получается смешиванием воды с хлористым водородом, является бесцветной жидкостью с кислым удушливым запахом, технический раствор имеет желтоватый оттенок из-за содержания в нем молекул двухатомного хлора и железа. При содержании в воде более 38% кислоты она улетучивается, поэтому концентрированные растворы нельзя приобрести в розничной торговле. Так как любая кислота разъедает металлы, в состав HCl добавляют специальные присадки и ингибиторы, препятствующие химической реакции разложения меди или нержавейки.

Кислоты

Ортофосфорная кислота Н3РО4. Представляет собой неорганическое бесцветное вещество без запаха сиропообразной консистенции, в химической промышленности исходным компонентом для дальнейшего использования является 85% водный раствор Н3РО4. Ортофосфорная кислота хорошо известна как отличный реагент для удаления ржавчины (она входит в состав большинства средств для борьбы с коррозией металлов), при этом она не оказывает разрушающего воздействие на металлические поверхности. Для очистки змеевиков теплообменников от оксидов используют различные концентрации ее растворов, оптимальное соотношение 1 к 6.

Аминосульфоновая кислота (NH3SO3). Сульфаминовую кислоту широко применяют в промышленности для удаления труднорастворимых солевых отложений, накипи, известкового налета из трубопроводов, различного вида теплообменников. Она входит в состав многих промышленных и бытовых антинакипинов, хорошо растворяется в воде, обладает значительно менее разрушающим воздействием на металлы, чем серная и соляная кислоты. Выпускается и поставляется на рынок в виде порошка из мелких кристаллов белого цвета, перед применением разбавляется водой в нужной пропорции.

Бытовые кислоты. Лимонная (С6Н8О7) и уксусная (С2Н4О2) кислоты, являющиеся неоспоримыми лидерами по применению в быту, не так вредны для человеческого здоровья, как растворы приведенных выше технических кислот. Они оказывают на металл меньше негативного воздействия, но в то же время не так интенсивно разлагают оксиды солей, из которых состоит накипь. При использовании уксуса и лимонной кислоты время очистки увеличивается в несколько раз, и нет гарантии в том, что работы будут проведены эффективно.

 

Электромеханические способы очистки от накипи

Для очистки спирали теплообменника от накипи можно использовать механический метод подачи очистного раствора под напором, в загородных условиях для этих целей эффективно использовать мини-мойку высокого давления, при этом водонагреватель разбирают.

Также ускорить процесс очистки можно с помощью малогабаритного центробежного электронасоса или вибрационный помпы (многие используют агрегат от старой стиральной машины). Для этого электронасосное оборудование подключают к входу змеевика и емкости с очищающим раствором, а жидкость с выхода сливают в основной резервуар с антинакипином, обеспечивая тем самым циркуляцию состава по кругу. Применение электронасоса значительно ускоряет процесс и повышает качество очистки — жидкость пропускается через змеевик с повышенным давлением, что способствует эффективному отслоению накипи.

Варианты подключения насосов и помп для очистки теплообменника

Очистка газовой колонки от накипи

Существует два способа чистки теплообменников, в первом случае его оставляют в колонке, а во втором — демонтируют, извлекая наружу, при этом одновременно проводят очистку от копоти. Перед тем как почистить теплообменник газовой колонки, приобретают чистящее средство, отрезок гибкого резинового шланга длиной около 60 см и подготавливают пластиковую бутылку объемом 2 л, полимерную емкость для слива отработанного очистителя. Трубку выбирают с таким расчетом, чтобы ее можно было надежно закрепить на горлышке пластиковой бутылки и входном штуцере теплообменника.

Чтобы почистить газовую колонку от накипи в домашних условиях без извлечения теплообменника, поступают следующим образом:

  • Готовят чистящее средство, разводя порошок или жидкий концентрат водой в нужной пропорции.
  • Снимают защитный кожух с газовой горелки, не забывая предварительно перекрыть подачу воды, открывают поочередно краны горячей и холодной воды на смесителе, сливая воду из змеевика.
  • Откручивают гибкие шланги подачи холодной и отвода горячей воды.
  • В газовой колонке входной и выходной патрубки теплообменника расположены внизу в одной плоскости, поэтому для очистки необходимо, чтобы подаваемая самотечным способом жидкость находилась выше уровня самой высшей точки змеевика, этого добиваются использованием длинного шланга. Его надежно фиксируют к входному патрубку теплообменника на хомуты или используют переходные резьбовые фитинги, на другом конце шланга закрепляют горлышко обрезанный сверху пластиковой 2-х литровой бутылки.
Пример проведения очистных мероприятий
  • Бутылку крепят проволокой сверху корпуса газовой колонки в вертикальном положении, соединение должно быть прочным и надежным, ведь при очистке используются агрессивные кислотосодержащие вещества.

На заметку: Змеевик можно чистить как в прямом, так и в обратном направлении, соответственно подключая шланг к входному или выходному штуцеру с учетом удобства обслуживания.

Неплохой вариант для закрепления бутылки — применение жесткой металлопластиковой трубки, которая удерживает ее вес без посторонней помощи, в этом случае достаточно слабой фиксации емкости проволокой на корпусе колонки для поддержания ее в вертикальном положении.

  • После установки бутылки заливают в нее чистящую жидкость до половины, не стоит заполнять емкость до краев с учетом того, что во время реакции пузырьки воздуха могут вытолкнуть раствор наружу через верх резервуара, под выходной патрубок для сбора отработанного раствора подставляют пластиковую емкость.
  • После протекания всей жидкости через змеевик (в зависимости от степени загрязнения 30 — 120 минут) можно использовать ее повторно, предварительно профильтровав отработанный раствор, или завершить процесс очистки, если на выходе вместо капель появилась непрерывная струя.

Совет: Чтобы промыть теплообменник быстрее и качественнее, включают газовую горелку на небольшую мощность — нагретый раствор эффективнее убирает накипь.

  • По завершении работ подключают гибкую подводку к теплообменнику, включают воду и проверяют интенсивность потока из крана горячей воды, если она соответствует подаче холодной, агрегат собирают в исходное состояние, в противном случае процесс очистки проводят повторно.
Конструктивное устройство типовой колонки

Очистка водонагревателя от копоти

Продукты выгорания топлива с течением времени покрывают нижнюю поверхность радиаторных пластин, этому способствуют:

  • длительное использование максимального пламени газовых горелок;
  • недостаточная тяга в дымоходном трубопроводе из-за плохой вытяжки;
  • плохое соотношение газа и кислорода в воздухе, способствующее его неполному сгоранию;
  • чрезмерное содержание в газовой смеси примесей;
  • попадание на радиаторные пластины с дымохода содержащих сажу капель конденсата.

Очистку от копоти проводят при площади загрязнений более 30%, в большинстве эпизодов ее совмещают с ликвидацией накипи. Не обязательно вызывать мастера для снятия слоя сажи с радиаторных пластин, но ради экономии финансовых средств придется самостоятельно извлекать наружу теплообменник из корпуса водонагревателя, что является задачей средней сложности для рядового обывателя.

При проведении этой операции понадобится следующий сантехнический и бытовой инструмент:

  • Разводной сантехнический ключ, в редких случаях газовый (трубный ключ Bacho), рассчитанный на работу с гайками сгонов.
  • Набор крестообразных и плоских отверток, стамеска.
  • Пассатижи, плоскогубцы или круглогубцы.
  • Расходные материалы — паронитовые прокладки, льноволокно.

На рынке представлен широкий ряд газовых колонок отечественного и зарубежного производства (Вектор, Бош, Астра, Нева, Оазис, Юнкерс, Термет, Электролюкс), при одинаковом принципе работы они имеют различные схемы сборки, поэтому остановимся на общих этапах их разборки для извлечения теплообменника:

  • Отключают подачу воды и газа, снимают верхний защитный кожух и ручки, отсоединяют от теплообменника подводящий воду патрубок, вытаскивая фиксирующие защелки и отводя его в сторону.
  • Аналогичным образом поступают с выходным патрубком змеевика, отвинчивая от него гибкую подводку, с обоих отводов извлекают фильтры грубой очистки и откладывают их в сторону.
  • Снимают и отводят в бок датчик обратной тяги, от рамы агрегата отвинчивают блок газовых горелок и извлекают его наружу.
  • Отщелкивают от корпуса колонки фиксирующую пластину и снимают скобки, удерживающие теплообменник, откручивают дополнительные винты, закрепляющие корпус змеевика, после чего его извлекают наружу и подвергают дальнейшей очистке.
Демонтаж теплообменника колонки для нагрева воды

Теплообменник несложно очистить от сажи самому следующими методами:

  1. Помещают его в пластиковый таз с теплой водой и добавляют в нее бытовое средство для мытья посуды, мягкой губкой вытирают маслянистый налет сажи.
  2. Неплохим средством для удаления копоти является хозяйственное мыло, которые натирают на терке и помещают в горячую воду.
  3. При одновременной очистке от сажи и накипи в перевернутый змеевик заливают чистящий раствор и оставляют его в таком положении на несколько часов — за это время накипь должна полностью раствориться в антинакипине.
  4. Так как блок газовых горелок во время демонтажа змеевика снимают, его также можно почистить, опустив в таз с водой и бытовым средством для мытья посуды и протирая губкой загрязненные участки. После проведения очистки его несколько раз промывают в теплой воде и тщательно просушивают, в противном случае попавшая в мелкие каналы запальника и фитилей вода будет препятствовать прохождению газа.
Очистка теплообменника от копоти

Видео: как почистить газовую колонку

В представленных видео подробно изложены:

Полная поэтапная разборка газовой колонки Ariston Fast 14 CF P со снятием теплообменника и промывка его от накипи сульфаминовой кислотой;

чистка колонки в домашних условиях соляной кислотой без извлечения теплообменника с помощью приподнятой и закрепленной на корпусе агрегата пластиковой бутылки;

При эксплуатации газовой водонагревательной колонки эффективность ее работы значительно снижается в связи с появлением накипи на внутренних стенках змеевика, для борьбы с этим явлением используется широкий ряд химических и бытовых средств для удаления нерастворимых оксидов солей.

Все операции по очистке колонки от накипи довольно просто провести своими руками после откручивания кожуха и пары гибких подводок, не слишком сложно при некоторых слесарных навыках целиком извлечь теплообменник из колонки для проведения профилактических работ, связанных с комплексным удалением накипи и копоти.

Как почистить газовую колонку в домашних условиях

Вы заметили, что при обычном напоре воды, газовая колонка перестала нагревать достаточно воду. Водонагреватель трудно запустить в работу, а после запуска самопроизвольно может отключиться. Возможно, у кого-то напор горячей воды заметно снизился. Все эти недостатки указывают на то, что пора прочистить нагревательный прибор.

Содержание

Из чего состоит колонка

Каждый отдельный узел колонки состоит из множества деталей, которые долго перечислять. Нам надо знать только название узлов, которые подвергаются чистке, чтобы иметь понятие, как почистить газовую колонку. Итак, газовая колонка состоит, из:

  1. Теплообменника, другое название радиатор;
  2. Основной горелки;
  3. Горелки розжига;
  4. Водяного узла.

Всю эту конструкцию красиво прикрывает панель, на которой расположены ручки управления.

Теплообменник — представляет собой кожух, выполненный в современных газовых колонках из листовой меди, вокруг которого обвита труба, соединенная с радиатором.

Основная горелка — это труба (коллектор), запаянная с торца, по всей длине. На коллекторе расположены форсунки, которые помещены в каналы с соплами для выхода газа.

Горелка розжига в старых конструкциях зажигалась спичками, но в современных моделях пламя появляется автоматически после открытия воды. В эту сложную конструкцию входят:

  1. Запальная горелка;
  2. Электроды розжига;
  3. Термопара, соединенная с электромагнитным клапаном.

Водяной узел — служит для предотвращения попадания механических примесей в систему и для регулировки давления подачи воды.

Ремонт водонагревателя

В домашних условиях, устранить все неисправности своими руками невозможно, особенно в узлах, связанных с подачей газа. Будет безопасней пригласить специалистов газовщиков, но многое все же можно сделать своими руками. После снятия защитного кожуха появляется доступ к узлам.

Начинаем ремонт с водяного узла

Для этого надо:

  1. Отсоединить его от корпуса водонагревателя, предварительно перекрыв поступление воды и слив остатки влаги открытием крана для горячей воды.
  2. Открутить, осмотреть, промыть сетчатый фильтр – чаще всего загрязняется именно он. Его можно чистить без снятия узла с колонки, чем чаще, тем лучше.
  3. Проверить кран-буксу, она не ремонтируется, а меняется в случае окисления.
  4. Механический регулятор воды почистить.
  5. Снять крышку и осмотреть мембрану и уплотнение штока водяного узла. Эти вещи только меняются на новые.
  6. Водяной узел собирается и устанавливается на место.

Как помыть теплообменник своими руками

Прежде чем его снимать, необходимо осмотреть радиатор, возможно, он покрыт сажей, чтобы не стать грязным, удалите сажу кисточкой. Дальше выполняем следующее:

  1. Откручиваем гайки трубок входа и выхода воды из теплообменника от водяной системы.
  2. Еще раз в удобном месте очищаем радиатор от сажи.
  3. Устанавливаем теплообменник в свободную емкость, радиатором вниз. Наливаем очищающую жидкость, полностью покрыв радиатор.
  4. Через воронку заливаем в трубку жидкость, способную бороться с накипью. Ее готовят из лимонной или уксусной кислоты, разведенной в воде. Концентрация лимонной кислоты по отношению к воде 100 г на 0,5 л. Уксуса столового 1/3, не перепутайте с уксусной кислотой.
  5. Оставляем теплообменник в покое минимум на 6 часов.
  6. Сливаем жидкость и напором холодной воды промываем радиатор и трубку.
  7. После полного высыхания радиатор устанавливаем на его законное место в газовой колонке.

Удаление сажи с основной горелки

Враг горелки это сажа, образовавшаяся на соплах горелки, для того чтобы ее почистить своими руками выполните следующее:

  1. Откручиваем систему розжига;
  2. Освобождаем основную горелку от крепления;
  3. Отсоединяем одну из половин горелки от коллектора, потом другую;
  4. Чистим форсунки от пыли. Промыть каналы секции;
  5. Дать высохнуть и собрать;
  6. Установить на прежнее место.

Ремонт горелки розжига

Своими руками у этой горелки можно почистить только трубку подвода газа к форсунке, ее отсоединяют и продувают. Тонкой проволокой, желательно медной, прочистить отверстие запального сопла.

Если вы решили почистить колонку самостоятельно, то помните, что после сборки узлов обязательно мыльным раствором необходимо проверить места соединений газовых частей на предмет выявления протечки. В случае обнаружения устраните неисправность.

Вас может заинтересовать

Как правильно почистить газовую колонку в домашних условиях

 

Газовая колонка — это очень удобное и экономичное оборудование для обеспечения жилища горячей водой. Главным элементом прибора является теплообменник, на котором скапливаются продукты горения. Именно поэтому иногда появляется необходимость почистить газовую колонку. Специалисты рекомендуют проводить чистку не реже одного раза в шесть месяцев. Весь процесс можно провести самостоятельно, соблюдая необходимые правила безопасности.

Блок: 1/8 | Кол-во символов: 455
Источник: https://oventilyacii.ru/ventilyaciya/kondicionirovanie/kak-pochistit-gazovuyu-kolonku.html

Разделы статьи

Как это работает?

Газовая колонка — это относительно несложное приспособление для подогрева воды. Сверху расположен теплообменник, подключенный к водопроводной системе. Под ним имеется горелка, которая присоединена к газовой трубе.

Во всех современных моделях розжиг горелки автоматизирован, вручную разжигают только очень старые или неисправные модели. Последние лучше отремонтировать, чтобы не рисковать здоровьем домашних и целостностью имущества.

Конструкция скрыта защитным кожухом, на передней панели которого обычно расположен блок управления. Он регулирует максимальную температуру нагрева воды, количество газа и другие показатели работы прибора. Сверху имеется колпак и дымоходная труба, по которой удаляют продукты горения.

Когда в доме открывают воду, горелка автоматически включается, газ прогревает воду до необходимой температуры. Авторозжиг настроен таким образом, чтобы колонка включалась только при достаточно высоком напоре воды в системе. Еще один важный показатель — наличие хорошей тяги.

Перед началом работ по очистке бытовой газовой колонки нужно познакомиться с устройством прибора, чтобы правильно его разобрать

Процесс нагревания воды сопровождается выпадением жесткого осадка, который постепенно накапливается внутри теплообменника. Трубки забиваются отложениями, в результате качество нагрева ухудшается, работа устройства становится недостаточно эффективной. Регулярная очистка колонки поможет избежать подобных проблем. Помимо накипи внутри прибора могут собираться и другие загрязнения, все зависит от качества воды.

Бытовая газовая колонка устроена не особенно сложно: вода движется по трубе теплообменника, ее подогревает горелка, розжиг включается автоматически

О том, что колонку пора почистить, говорят следующие признаки:

  • напор из крана с горячей водой значительно слабее, чем струя из холодного крана;
  • напор хороший, но почти сразу после включения колонка гаснет;
  • устройство вообще перестало включаться независимо от напора;
  • наблюдается недостаточный прогрев потока по сравнению с прежним состоянием;
  • вода нагревается до нужной температуры, но слишком медленно.

Некоторые неисправности могут наблюдаться также и при поломке запорного крана, который установлен на входе в колонку. Не помешает сначала проверить его, и лишь после этого приступать к очистке.

Блок: 2/7 | Кол-во символов: 2297
Источник: https://je7.ru/kak-pochistit-gazovuyu-kolonku-metody-sobstvennoruchnogo-obsluzhivaniya/

Почему нагревателю необходима чистка?

Газовый агрегат нагревает воду, сжигая природный или сжиженный газ, поэтому он относится и к водопроводному, и к газовому бытовым приборам. В газовой части скапливаются продукты горения, которые следует регулярно вычищать. Засориться могут и жиклёры (отверстия запальника и горелки).

Основной проблемой водопроводной части нагревателя является накипь. Это соли, растворённые в воде, которые выпали в виде осадка и осели на стенах водопроводной трубы нагревателя. К неприятностям приводит образование накипи и в теплообменнике. Чтобы вода, протекающая над горелкой, успевала прогреться, в теплообменнике поток распределяется по тонким трубкам. Забивая их, накипь значительно снижает эффективность работы прибора и даже может вывести его из строя.

 

Промывка теплообменника газовой колонки (Удаление накипи)

 

Блок: 2/8 | Кол-во символов: 1105
Источник: https://oventilyacii.ru/ventilyaciya/kondicionirovanie/kak-pochistit-gazovuyu-kolonku.html

Что можно сделать своими силами?

Перед началом работ отключите подачу газа и воды в колонку. Ни в коем случае не пытайтесь самостоятельно ремонтировать газовую часть аппарата! Это может привести к аварийной ситуации.

В домашних условиях можно почистить:

  • горелку от сажи и нагара;
  • внутренние части от пыли;
  • теплообменник – от накипи;
  • водопроводные трубы.

А также проверить:

  • состояние водоприемного узла;
  • герметичность соединений;
  • исправность датчика тяги;
  • наличие смазки.

Все операции проводят в определенной последовательности.

Блок: 3/7 | Кол-во символов: 514
Источник: https://seberemont.ru/kak-pochistit-gazovuyu-kolonku-ot-nakipi/

Признаки загрязнения прибора

О том, что колонку пора чистить, сигнализируют некоторые признаки. К основным относятся:

  • Громкий хлопок при зажигании горелки (по отзывам пользователей, наиболее часто встречается у моделей фирмы «Бош»).
  • Высыпание сажи из-под кожуха.
  • Вода нагревается очень медленно, несмотря на максимальную мощность.
  • Слабый напор воды (но некоторые модели, например, «Нева» или «Авангард», хорошо работают даже при низком водяном давлении).
  • Горелка отключается почти сразу после зажигания.
  • Срабатывание датчиков тепловой защиты. Накипь по своей структуре пористая, поэтому обладает теплоизолирующими свойствами, и это препятствует охлаждению агрегата.

Если зафиксирован хотя бы один из этих признаков, необходимо почистить газовую колонку от накипи и продуктов горения. Перед любыми манипуляциями с нагревателем следует перекрыть газ и кран подачи воды.

 

Блок: 3/8 | Кол-во символов: 1086
Источник: https://oventilyacii.ru/ventilyaciya/kondicionirovanie/kak-pochistit-gazovuyu-kolonku.html

Как узнать, что газовую колонку пора чистить?

Чистка газовой колонки необходима, если:

  • Колонка не включается, либо отключается, поработав некоторое время. При этом точно известно, что газ и вода в колонку поступают.
  • Постоянно срабатывают датчики тепловой защиты колонки. Слой накипи имеет пористую структуру и обладает теплоизолирующими свойствами, что мешает нормальному охлаждению колонки.
  • Заметно снизилась эффективность колонки: при нормальной работе горелки вода нагревается значительно слабее.
  • Слабый напор на выходе из колонки при нормальном напоре на входе. Вода не может пробиться через перекрытые накипью каналы.

Перед любыми операциями с колонкой обязательно перекрываем краны подачи воды и газа.

Чистка водоприемного узла

Водоприемный узел установлен на входе водопроводящей системы колонки, имеет сетчатый фильтр для предотвращения забивания трубок теплообменника крупными частицами ржавчины и осадка, а также мембрану автоматической подачи газа при включении крана воды.

  • Извлекаем водоприемный узел из корпуса колонки.
  • Открутив соединительные винты, открываем корпус.
  • Прочищаем фильтр и промываем его сильным напором воды.
  • Проверяем мембрану. Мембрана должна быть плоской, если мембрана имеет ярко выраженную вогнутость, значит, она выработала свой ресурс и подлежит замене. Можно заменить «родную» мембрану старой колонки на современную силиконовую, имеющую гораздо больший срок службы.
  • Закрываем крышку водоприемного узла, «наживляем» винты и затягиваем поочередно диаметрально противолежащие пары винтов. Таким образом, обеспечивается равномерное натяжение мембраны.

Чистка теплообменника

  • Отсоединяем трубки входа и выхода воды в теплообменник. Если прочистка теплообменника проводится нерегулярно, гайки крепления могут быть забиты накипью, препятствующей их отсоединению. В этом случае рекомендуем воспользоваться специальной жидкостью ВД-40, приобрести которую можно в любом автомагазине. Необходимо с помощью масленки закапать жидкость в места соединения гаек. Можно использовать и «Силит» от накипи. Через 15-30 минут гайки можно будет открутить. Если не получается, попробуйте «обстучать» гайку со всех сторон.
  • Отсоединив теплообменник, с помощью воронки заливаем в него средство для удаления накипи. В качестве такого средства отлично подойдет раствор 100 г лимонной кислоты на 0,5 л горячей воды. Также можно прочистить теплообменник столовым девяти процентным уксусом, разведенным водой в пропорции один к трем. А вот использовать соляную кислоту не рекомендуется, так как она может вступать в реакцию с металлом, из которого изготовлен теплообменник, что только усугубит ситуацию. Оставляем раствор внутри теплообменника на ночь.
  • Раствор сливаем, тщательно промываем теплообменник. Если не удалить отошедшую от стенок накипь, она может забить трубки теплообменника, поэтому теплообменник промываем сильной струей воды из-под крана. Для этого можно приспособить трубки соответствующего диаметра.
  • Ставим промытый теплообменник на место, затягиваем гайки крепления, предварительно поменяв уплотнительные прокладки.

Удаление копоти и нагара

В отличие от водопроводной части, разбирать самостоятельно газовую часть колонки нельзя, этим должен заниматься только мастер из городской газовой службы. Единственное, что мы можем сделать для устранения копоти – удалить нагар из жиклеров горелки.

  • Жиклеры прочищаются тонкой медной проволокой.
  • Копоть сметается металлической щеткой.
  • Желательно сразу же проверить колонку на протечку газа. Для этого необходимо приготовить мыльный раствор, который наносится на все места соединений газовых труб и агрегатов. На утечку газа укажет образование в месте стыка характерных пузырьков. Если обнаружили утечку – перекрываем газ и звоним 104.

Свести необходимость чистки колонки к минимуму можно с помощью профилактики. Более длительной работе колонки без сбоев и чисток способствует использование фильтров и устройств для снижения жесткости воды.

Блок: 3/3 | Кол-во символов: 3940
Источник: http://klivent.biz/otopleniye/kak-pochistit-gazovyj-vodonagrevatel.html

Промышленные и народные средства

Существует немало средств, с помощью которых можно почистить газовую колонку в домашних условиях. Владелец может выбрать промышленную химию или народные рецепты.

  • Бытовая профессиональная химия. Эти препараты помогут быстро и достаточно просто отмыть агрегат. Главное — следовать инструкции и соблюдать меры предосторожности. К популярным маркам можно отнести Оазис, Электролюкс, Сантри Лайт, Бош, Вектор.
  • Народные способы. Они тоже неплохо справляются с очисткой деталей агрегата. Обычно применяется раствор лимонной кислоты (500 мл воды и 100 гр кислоты), уксус (200 мл на 500 мл воды), мыльно-содовый раствор (200 гр. хозяйственного мыла, 200 гр. каустической соды, 10 литров горячей воды). Иногда умельцы применяют ортофосфорную, аминосульфоновую и даже соляную кислоту. Если первые две относительно безопасны, то соляная может значительно источить материал теплообменника.

Если загрязнения застарелые, проводить чистку потребуется несколько раз, используя новую дозу чистящего средства. Важно: осуществлять промывку теплообменника из алюминия раствором уксуса и кислотами не рекомендуется, так как это может повредить стенки прибора.

 

 

 

 

Блок: 4/8 | Кол-во символов: 1484
Источник: https://oventilyacii.ru/ventilyaciya/kondicionirovanie/kak-pochistit-gazovuyu-kolonku.html

Когда пора чистить газовую колонку?

О том, что требуется чистка газовой колонки, свидетельствуют следующие признаки:

  • главная горелка поджигается с трудом, а иногда с сильным хлопком;
  • нагреватель запускается, но работает недолго, основная горелка быстро отключается;
  • снизу, из-под кожуха начинает сыпаться сажа;
  • агрегат работает на максимальной мощности, но вода еле-еле нагревается.

Признаки для чистки колонки

Хлопок в камере сгорания говорит о том, что перед воспламенением в ней успевает накопиться большое количество газа. Значит, проблема – в запальнике, что поджигает топливо с опозданием. Визуальный признак – слабое пламя фитиля, окрашенное в желтый цвет, это признак засорения жиклера. Решение вопроса заключается в том, чтобы прочистить запальник. В большинстве моделей колонок узел розжига можно без труда отсоединить от основной горелки и удалить мусор из жиклера.

К срабатыванию датчиков перегрева и тяги приводит копоть, накопившаяся между оребрением теплообменника. Сечение газовоздушного тракта значительно уменьшается, а температура воды – возрастает. В этом случае необходимо очистить радиатор и стенки камеры сгорания от сажи. Крайняя степень загрязнения – это когда из-под декоративного стального фартука выпадают хлопья сажи, покрывая пол или предметы под нагревателем.

Чистка запальника

Помните, что под теплообменником располагается основная горелка, и копоть в первую очередь засоряет ее сопла. То есть, первое загрязнение приводит ко второму и в результате своими руками придется выполнять 2 вида работ: удалять грязь из теплообменника и горелочного устройства.

Слабый прогрев проточной воды – это следствие уменьшения проходного сечения труб теплообменника, чьи внутренние стенки покрыты толстым слоем накипи. Признаком тотального «зарастания» внутреннего прохода трубок является заметное снижение давления воды на выходе из колонки при нормальном ее напоре на входе. Это соли, содержащиеся в водопроводной воде, интенсивно осаждаются на нагретых поверхностях труб и образуют прочный толстый налет. Тогда выполняется чистка газовых колонок, а точнее, теплообменников, от накипи методом промывки.

Блок: 2/5 | Кол-во символов: 2124
Источник: https://cotlix.com/kak-pochistit-gazovuyu-kolonku

Народные средства для очистки газовой колонки

Правила ухода за газовой колонкой подробно описаны в инструкции к прибору и отступать от этих требований может быть опасно. Если вдруг водонагреватель засорился, использовать для его чистки необходимо только средства, рекомендованные производителем. О них также должно быть указано в соответствующих пунктах мануала по эксплуатации. И доверить процесс чистки лучше профессионалам. В таком случае не только устранится засор, но и будет сохранена гарантия.

Важно! Самовольная читка несанкционированными средствами опасна для здоровья! Если в процессе удаления накипи или гари поврежден один из элементов колонки и появилась утечка газа, нужно немедленно звонить 104.

Только в том случае, если пользователь понимает все возможные последствия и принимает на себя ответственность, почистить прибор можно и самому. Чем же и как промыть газовую колонку (например, бренда Ariston) от накипи в таком случае? Можно применять и готовые препараты или народные методы. Что лучше и эффективнее: «ядреная» химия или «бабушкина» очистка, покажет сравнительная таблица:

Решает проблему/Народное средство/ Химический препарат

Накипь внутри теплообменника Смесь из 0,5 л горячей воды и 100 г лимонной кислоты. Calgon или Антинакипин (разъедает слои накипи внутри труб).
Плотный слой нагара (можно удалять только с теплообменника, чистку газовой части выполняют специалисты) Развести столовый уксус и теплую воду в соотношении 1:3. Можно использовать 7-10% соляную кислоту или другую сильную химию. Важно! Работа требует аккуратности: средство ни в коем случае не должно попасть на кожу или слизистую.

Блок: 4/10 | Кол-во символов: 1677
Источник: https://www.Moyo.ua/news/kak-pochistit-gazovuyu-kolonku-3-luchshikh-metoda.html

Как отмыть теплообменник?

Мероприятия по очищению теплообменника необходимо проводить в проветриваемом помещении либо на улице. Рекомендуется использовать специальные очки, перчатки, закрытую одежду, так как используемые для мытья вещества могут быть опасны. Почистить теплообменник газовой колонки можно так:

  • Отсоединить трубки, по которым вода входит в теплообменник и выходит из него. Возможно, что крепёжные гайки «закипели» и открутить их сложно. Поможет специальная жидкость ВД-40 или средство «Силит». Их следует залить в места соединения гаек и выждать около получаса. После этого открутить гайку будет гораздо проще.
  • В отсоединённый радиатор залить выбранное средство для чистки и оставить на ночь. При использовании промышленной химии следовать инструкции.
  • Слить состав, тщательно промыть теплообменник.

Процедура окончена. Чистый прибор устанавливается на место. Перед затягиванием крепёжных гаек рекомендуется поменять уплотнительные прокладки.

 

Блок: 5/8 | Кол-во символов: 1051
Источник: https://oventilyacii.ru/ventilyaciya/kondicionirovanie/kak-pochistit-gazovuyu-kolonku.html

Последовательность мероприятия по чистке горелки от сажи и нагара

Во многих квартирах проживают одинокие старики или женщины. Им легче заплатить мастеру, чем проводить операции по чистке газовой колонки от сажи самостоятельно. В этом есть свои положительные и отрицательные стороны. К последним относят только стоимость подобных услуг. В то же время, мастер проведет все операции без угрозы повреждения газопровода и заодно проверит его состояние.

Специалист придерживается инструкции по технике безопасности. Он отключит подачу воды и газа и проведет необходимые действия в такой последовательности.

  1. Снять кожух газовой колонки.
  2. Отсоединить проводку.
  3. Снять горелку.
  4. Отключить коллектор.
  5. Удалить сажу и нагар с электродов.
  6. Зачистить контактную группу жесткой щеткой и протереть влажной ветошью. Внутреннюю часть деталей очищают маленьким ершиком.
  7. Снять нагар с жиклера, датчиков и электродов.
  8. Отверстия жиклеров прочищают тонкой проволокой.
  9. Пыль из внутренней части колонки убирают с помощью домашнего пылесоса.
  10. Помыть все оборудование теплой мыльной водой и высушить.
  11. Установить детали на место.

По окончании работ все соединения газовых труб необходимо намазать мыльным раствором для того, чтобы выявить утечку в случае ее наличия. После сборки водопроводной части включают кран горячей воды и внимательно проверяют ее герметичность.

Блок: 6/7 | Кол-во символов: 1294
Источник: https://seberemont.ru/kak-pochistit-gazovuyu-kolonku-ot-nakipi/

Очищение водоприёмного узла

На входе системы, проводящей воду к колонке, установлен водоприёмный узел. Этапы очищения этой детали:

  • Извлечь узел из корпуса нагревателя.
  • Открутить соединительные болты, открыть корпус.
  • Прочистить фильтр, промыть чистой водой.
  • Проверить мембрану, которая должна быть плоской. Если же наблюдается выгнутость, значит, мембрана подлежит замене, так как свой ресурс она выработала.
  • Закрыть крышку узла, «наживить» болты и затянуть поочерёдно их противоположные пары, чтобы обеспечить равное натяжение мембраны.
  • Сетчатая мембрана часто забивается крупными частицами осадков и ржавчины, поэтому нуждается в регулярной чистке. Заводской фильтр, установленный на колонке, можно заменить на современный силиконовый, который имеет гораздо больший срок эксплуатации.

 

Блок: 6/8 | Кол-во символов: 839
Источник: https://oventilyacii.ru/ventilyaciya/kondicionirovanie/kak-pochistit-gazovuyu-kolonku.html

Выводы и полезное видео по теме

Интересный вариант промывки газовой колонки можно посмотреть в этом материале:

Здесь продемонстрирована процедура очистки теплообменника без демонтажа:

Любая газовая колонка нуждается в периодической очистке. Если техническое обслуживание выполнено правильно, прибор будет работать долго и эффективно.

Блок: 7/7 | Кол-во символов: 571
Источник: https://je7.ru/kak-pochistit-gazovuyu-kolonku-metody-sobstvennoruchnogo-obsluzhivaniya/

Удаление нагара из газовой части

Самостоятельно разбирать газовую часть нагревателя запрещается, этим занимаются только сотрудники службы газа. Но владелец может самостоятельно почистить запальник газовой колонки. Для этого необходимо открутить трубу, подводящую газ к агрегату, разобрать конструкцию запальника, снять форсунку и тщательно удалить грязь щёткой. Обычно именно эта деталь засоряется пылью и нагаром. Промыть форсунку и тройник горячим содовым раствором, затем чистой водой, высушить все детали, собрать конструкцию и установить её на место.

Блок: 7/8 | Кол-во символов: 558
Источник: https://oventilyacii.ru/ventilyaciya/kondicionirovanie/kak-pochistit-gazovuyu-kolonku.html

Как предупредить образование накипи?

Все способы очистки газовой колонки по-своему хороши. Но лучший вариант — предотвратить ее загрязнение. Существует, как минимум, два способа:

  • установить качественный фильтр. В теплообменник будет поступать чистая вода, а отложения можно легко убрать после разборки водоприемника;
  • на водопроводную трубу прикрепить электроумягчитель. Импульсы, посылаемые им, воздействуют на воду и предупреждают возникновение накипи.

Своевременное проведение профилактических процедур поможет значительно продлить срок службы газовой колонки. Внимательно следите за работой своего аппарата. Если обнаруживаются малейшие изменения, проведите внеплановую очистку.

Подробнее разобраться, как правильно прочистить газовую колонку от нагара и сажи, поможет видео ролик. Успехов!

 

Блок: 7/7 | Кол-во символов: 1096
Источник: https://seberemont.ru/kak-pochistit-gazovuyu-kolonku-ot-nakipi/

Кол-во блоков: 21 | Общее кол-во символов: 25012
Количество использованных доноров: 6
Информация по каждому донору:

  1. https://je7.ru/kak-pochistit-gazovuyu-kolonku-metody-sobstvennoruchnogo-obsluzhivaniya/: использовано 2 блоков из 7, кол-во символов 2868 (11%)
  2. http://klivent.biz/otopleniye/kak-pochistit-gazovyj-vodonagrevatel.html: использовано 1 блоков из 3, кол-во символов 3940 (16%)
  3. https://www.Moyo.ua/news/kak-pochistit-gazovuyu-kolonku-3-luchshikh-metoda.html: использовано 3 блоков из 10, кол-во символов 3203 (13%)
  4. https://cotlix.com/kak-pochistit-gazovuyu-kolonku: использовано 2 блоков из 5, кол-во символов 2979 (12%)
  5. https://seberemont.ru/kak-pochistit-gazovuyu-kolonku-ot-nakipi/: использовано 5 блоков из 7, кол-во символов 5444 (22%)
  6. https://oventilyacii.ru/ventilyaciya/kondicionirovanie/kak-pochistit-gazovuyu-kolonku.html: использовано 7 блоков из 8, кол-во символов 6578 (26%)

Как почистить газовую колонку в домашних условиях

В домах, к которым не подведено централизованное горячее водоснабжение, настоящим спасением становится установка газовой колонки. Но как устройство, в котором протекают процессы с участием водопроводной воды и горения природного газа колонка нуждается в периодической чистке от накипи и сажи.

Разберемся, как устроена газовая колонка, и как в домашних условиях почистить ее от сажи и накипи своими руками.

1. Устройство газовой колонки

Внешне прибор представляет собой закрытую металлическую коробку, как правило, белого цвета, с подведенными водопроводными и газовыми трубами. Суть работы колонки заключается в нагреве холодной водопроводной воды путем сжигания природного газа. Основными функциональными элементами газовой колонки являются следующие блоки:

  • Газовые горелки.
  • Запальник.
  • Теплообменник.

Принцип работы колонки следующий — при открывании крана с горячей водой задействуется запальник, вследствие чего розжиг поджигает газовые горелки, которые нагревают воду в теплообменнике, из которого подогретая вода подается на смесители. При этом нагретый воздух поднимается наверх и уходит через трубу в вентиляцию или сразу на улицу. Этот принцип присущ большинству моделям газовых колонок, таких как Бош, Электролюкс, Вектор, Мора, Беретта, Оазис, Астра, Юнкерс и т.д.

В моделях газовых колонок Нева Люкс установлен более современный тип теплообменника, представляющий собой змеевик в форме спирали, что обеспечивает более быстрый нагрев воды.

2. Причины накипи и нагара

Основными причинами загрязнения газовой колонки являются накипь и сажа в устройстве.

Накипь образуется в результате контакта водопроводной воды, содержащей в себе природные минералы, с нагревательным элементом, при котором соли начинают оседать на горячей поверхности теплообменника и патрубков, снижая при этом их просвет. Со временем это может привести к сильному засору, в результате чего, поток воды станет слабее или прекратится вовсе.

Нагар и сажа образуются на горелках в результате сжигания газа. Копоть оседает на радиаторе газовой колонки, тем самым ухудшая его теплопроводность, и на жиклерах горелок, в результате чего вода станет нагреваться значительно слабее.

3. Симптомы загрязнения

При значительном скоплении накипи, нагара, сажи и известковых отложений, газовая колонка начинает сигнализировать о проблеме следующими симптомами:

  • Слабый напор горячей воды, при том, что напор холодной воды достаточно сильный.
  • Слабый нагрев воды, при условии хорошего напора на входе.
  • Произвольное затухание горелок при открытых кранах горячей воды.
  • При открытии горячего крана не загораются горелки.

Рекомендуемая периодичность чистки газовой колонки прописана в руководстве к каждому устройству. Но даже если плановый срок еще не подошел, а подобные симптомы уже имеют место, следует незамедлительно вызвать сервисного специалиста, либо приступить к самостоятельной чистке прибора.

4. Водоприемный узел

Модуль представляет собой устройство, к которому подходят трубы с водопроводной водой и природным газом. При подаче воды срабатывает клапан и одновременно открывается подача газа к горелкам. Для защиты от попадания мелкого мусора внутри устройства располагается фильтр газовой колонки, представляющий собой мембранную сетку.

При очистке газовой колонки следует выкрутить соответствующие винты и проверить фильтр. Если мембрана сильно выгнута, ее следует заменить, если же нет, то просто почистить фильтр под струей воды и вернуть нам место. При установке фильтра обратно в водоприемный узел следует равномерно закручивать соответствующие противостоящие винты, придавая одинаковое натяжение по периметру мембраны.

5. Теплообменник

Чтобы почистить теплообменник газовой колонки следует перекрыть подачу газа и воды. Затем необходимо открутить гайки, крепящие трубы подачи воды в теплообменник. При невозможности открутить гайки их следует обработать жидкостью WD-40.

После демонтажа теплообменника его следует прочистить как от накипи внутри, так и от нагара и патины снаружи.

Химические средства

Перед тем как приступать к механической очистке следует предварительно растворить плотный слой нагара и накипи. Для этого можно воспользоваться как покупными средствами, например «Calgon», так и применить народные средства:

  • В ½ литра горячей воды растворить 100 грамм порошка лимонной кислоты.
  • Развести в соотношении 1:3 столовый уксус и теплую воду.

Приготовленный раствор следует залить внутрь теплообменника, а само устройство поместить в таз и полностью наполнить этим же раствором. Устройство следует оставить на сутки, после чего приступать к механической очистке.

Важно! Для чистки змеевика теплообменника не рекомендуется использовать соляную кислоту.

Механическая очистка

Чтобы очистить радиатор теплообменника колонки механически следует воспользоваться щеткой или минимойкой высокого давления. Щетка и высокое давление воды отлично удаляет скопившуюся в радиаторе сажу и гарь.

Для прочистки накипи внутри устройства можно «выдуть» ее той же минимойкой или подсоединить гибкими шлангами вход теплообменника к крану с водопроводной водой. Под давлением куски накипи должны спокойно выйти из системы.


6. Газовая горелка

В отличие от блоков подачи воды модули подачи газа разбирать и чистить могут только специалисты газовой службы. По этой причине самостоятельно почистить горелки можно только поверхностно. Для этого следует воспользоваться щеткой с жесткой щетиной, которой удаляется основная часть нагара. Для прочистки забитых жиклеров следует воспользоваться тонкой проволокой, которой прибивается засор.

Фитиль и запальник колонок с ручным и автоматическим розжигом чистятся также щеткой и тонкой проволокой.

Важно! После чистки горелок следует сразу же проверить устройство на наличие утечки газа. При обнаружении запаха газа следует перекрыть вентиль и вызвать аварийную газовую службу (телефон: «04» со стационарного или «104» с мобильного телефона).

7. Как почистить газовую колонку: Видео

8. Заключение

Своевременная периодическая чистка газовой колонки – необходимое мероприятие, которое можно поручить сервисной службе или выполнить самостоятельно. При этом следует помнить, что узлы, связанные с подачей газа в устройство должны обслуживаться исключительно специалистами газовых служб.

А чтобы почистить дымоход газовой колонки необходимо отсоединить трубу от прибора, и удалить засор сантехническим тросом.

Для поиска специалиста для очистки газовой колонки, а также другой бытовой техники опубликуйте свое поручение на нашей бирже, указав приемлемую для Вас сумму. Через некоторое время исполнители откликнутся на Ваше поручение.

Посмотреть последние поручения

Промывка теплообменник: подробная инструкция

Как промыть теплообменник от накипи

Чтобы ваш котел отработал бесперебойно весь заявленный срок службы и даже больше — необходимо проводить регулярную профилактическую очистку котла от накипи и сажи. Самое трудное, что вам предстоит в этом процессе – промывка теплообменник.

Частота профилактики обычно определяется заводом-изготовителем и прописана в паспорте на котел. Однако это некая усредненная величина, в реальности же она зависит от того работает ли котел на подготовленной или обычной воде и какова степень жесткости этой воды.

Наиболее подвержены образованию накипи двухконтурные котлы, имеющие вторичный контур для ГВС. По мнению специалистов, такие котлы нуждаются в промывке ежегодно, а при повышенной жесткости воды – до 2-х раз в год.

Содержание:

  1. Признаки того, что теплообменник нуждается в промывке
  2. Чем опасна накипь для котла
  3. Какие существуют варианты промывки
  4. Пошаговая инструкция промывки теплообменника
  5. Установка магнитной обработки воды

Признаки того, что теплообменник нуждается в промывке

Покупая отопительный и водонагревающий котел, потребитель должен понимать, что данное оборудование нуждается в регулярной профилактической очистке от накипи.

Одноконтурный отопительный котел рекомендуется чистить от накипи 1 раз в 3-4 года. Процесс накипеобразования происходит в нем только при замене либо добавлении в систему свежей воды. Делается это достаточно редко, поэтому особых проблем с накипью в таком котле возникать не должно.

 С двухконтурным котлом дело обстоит немного иначе. В зависимости от жесткости вашей воды промывка теплообменник контура ГВС при жесткой воде должна быть ежегодной. При более мягкой воде вы можете чистить теплообменник контура ГВС 1 раз в 1,5-2 года.

Контур отопления двухконтурного отопительного котла необходимо чистить с той же периодичностью, что и у одноконтурного котла. Профилактическую чистку желательно делать перед началом отопительного сезона.

Проведение профилактической чистки и промывки теплообменника экономически выгоднее и безопаснее для потребителя, чем проблемы, связанные с поломкой, ремонтом или заменой котла в разгар отопительного сезона. Поэтому рекомендуем вам не игнорировать обслуживание вашей техники.

Помимо регулярной профилактики вы можете воспользоваться одним из следующих способов подготовки воды для котла:

  • Ионный обмен
  • Полифосфатные дозаторы
  • Магнитная обработка воды
  • Использование дистиллированной воды или антифриза (только на замкнутом контуре)

Используя для котла подготовленную воду вы частично или полностью сможете решить вопрос накипеобразования и необходимость в постоянной профилактической промывке теплообменника пропадет.

Если вы не проводите регулярного обслуживания котла, обратите внимание на следующие признаки, свидетельствующие о том, что котел нуждается в очистке:

  • упал напор воды и давление в системе
  • увеличился расход газа или электроэнергии
  • снизилась температура в помещении при обычных условиях работы котла
  • из котла слышны булькающие и шипящие звуки

Эти факторы чаще всего свидетельствую о зарастании теплообменника и трубок, через которые проходит вода, накипью.

Чем опасна накипь для котла

Накипь представляет собой твердые отложения солей жесткости, оседающие на металлических стенках теплообменников и труб, по которым циркулирует вода. Зарастание накипными отложениями стенок теплообменника и труб приводит к уменьшению диаметра внутреннего прохода и как следствие – уменьшению напора воды, падению давления в системе, повышенной нагрузке на насос, а также перегреву и разрушению стенок теплообменника.

Чтобы не выйти из строя котлу нужно равномерно нагреваться и так же равномерно охлаждаться. С накипью это становится невозможным, т.к. она обладает очень низкой теплопроводностью. Металл, нагревающийся с внешней стороны (например, газом), из-за слоя накипи не может отдать тепло теплоносителю. В результате возникают локальные места перегрева металла, который при росте температуры, может потечь, образовав свищ.  На промышленных котлах это приводит к возникновению аварийных ситуаций.

На бытовых котлах слой накипи в первую очередь ведет к перерасходу тепловой энергии (газ либо электричество), идущей на нагрев теплоносителя. Из курса теплофизики известно, что слой накипи в 5 мм приводит к перерасходу тепловой энергии до 30%. Также накипь приводит к ускоренному износу либо полному выходу из строя деталей котла.

Особенно актуальна проблема зарастания накипью на двухконтурных котлах. Если в систему отопления есть вариант залить подготовленную воду или специальный теплоноситель, то контур ГВС нуждается в обязательной защите и регулярной очистке от накипи, т.к. работает на проточной водопроводной воде.

Итак, если накипь своевременно не удалять и не использовать современные способы предотвращения отложений накипи, то котел постепенно будет зарастать.  Сначала образуется тонкий, легкоудаляемым налет, затем он наслаивается, и с течением времени, появляется толстый известковый камень, удалить который за один раз практически невозможно даже при помощи сильнодействующих антинакипных средств.

Поэтому обслуживание котла должно быть регулярным.  Хороший хозяин также обязательно выберет подходящий ему способ умягчения воды для предотвращения отложений.

Какие существуют варианты промывки

Очистить котел от накипи возможно механически, проведением декальцинации, а также способами, предотвращающими отложения — установкой систем водоподготовки или заполнением отопительной системы специально подготовленной водой (для одноконтурных котлов).

Механическая чистка чаще всего используется на промышленных котлах совместно с использованием декальценирующих средств (кислот или специальных антинакипинов). Это очень трудоемкая процедура, т.к. порой, налет настолько твердый, что его приходится высверливать.

В бытовых условиях для предотвращения отложений рекомендуется установка умягчающих воду фильтров либо антинакипных магнитных преобразователей. 1 раз в 3-4 года необходимо вскрывать котел, чтобы убедиться в отсутствии накипи. Т.к. идеального средства умягчения воды в природе не существует, и у всех фильтров имеются свои недостатки, то в малых количествах накипь все же может образовываться. Поэтому при необходимости детали котла необходимо очистить с помощью любого антинакипного средства.

Если вы выбрали вариант без установки предварительного умягчающего фильтра или магнитного преобразователя воды, то первое время котел необходимо вскрывать 1 раз в год перед отопительным сезоном. В течение 2-х лет вам будет ясно нуждается ли теплообменник котла в ежегодной промывке или вы можете проводить данную процедуру 1 раз в 2-3 года.

О фильтрах, предназначенных для умягчения воды, подробнее можно почитать в статье об умягчителях воды для квартиры

Для одноконтурных котлов самый простой способ защиты от отложений – заливка в отопительный контур дистиллированной воды или специального теплоносителя. В некоторых источниках утверждают, что дистиллированная вода имеет высокие показатели коррозионной активности, поэтому производители котлов и радиаторов не рекомендуют ее применение в качестве теплоносителя без дополнительных присадок, подавляющих коррозию.  Не спешите верить на слово таким заявлениям. Это скорее относится к очередному маркетинговому ходу. В замкнутой системе отопления при отсутствии поступающего в нее кислорода, окислительных процессов происходить практически не будет. Вода, полученная методом дистилляции, не приведет ваши трубы к разрушению.

Пошаговая инструкция промывки теплообменника

Итак, мы добрались, наконец-то, до момента вскрытия бытового отопительного котла для промывки его теплообменника.

Если вы по каким-то причинам не хотите разбирать котел – используйте способ промывки котла без съема теплообменника любой антинакипной жидкостью. В нашем случае это будет лимонная кислота, которая довольно хорошо удаляет накипь.

Понадобится:

  • лимонная кислота (30-50 г на 1 литр воды)
  • большая кастрюля на 6 литров (можно ведро)
  • шланг – 3шт
  • насос
  • блок питания

Последовательность действий:

  1. Перекройте подачу газа и воды в котле
  2. Отсоедините трубы подачи и выхода воды с первичного теплообменника
  3. Подключите шланги к контуру отопления
  4. К шлангу подачи воды подсоедините насос
  5. Третий шланг подсоедините к насосу и опустите в кастрюлю с водой
  6. Шланг слива воды также опустите в кастрюлю с водой
  7. Кастрюлю можно поставить на небольшой огонь, чтобы вода, циркулирующая между теплообменником и нашей кастрюлей, была горячей
  8. Засыпьте в воду лимонную кислоту
  9. Включите насос и оставьте котел в таком состоянии на 1-1,5 часа.
  10. Точно также промойте вторичный теплообменник ГВС, переподключив к нему шланги
  11. Включите насос и оставьте котел в таком состоянии на 2-3 часа, в зависимости от степени загрязнения котла накипью.
  12. После промывки присоедините все трубы подачи и выхода воды.

Если вы хотите промыть только контур ГВС и имеете возможность и желание разобрать котел для очистки – используйте способ промывки котла со съемом вторичного теплообменника. У разных марок котлов теплообменник снимается по-разному. Поэтому лучше всего найти инструкцию или видео по вашей модели в интернете.

Понадобится:

  • лимонная кислота (30-50 г на 1 литр воды)
  • кастрюля

Последовательность действий:

  1. Перекрыть доступ к котлу воды, газа, электричества
  2. Разобрать котел и снять  вторичный теплообменник
  3. При помощи пылесоса или щетки почистить все поверхности внутри котла
  4. Вторичный теплообменник положить в кастрюлю и покрыть водой, разведенной с лимонной кислотой (30-50г на 1 литр воды). Залить раствор воды с лимонной кислоты внутрь теплообменника, таким образом, чтобы вода показалась в отверстии подачи ГВС
  5. Прокипятить кастрюлю с теплообменником в течение 30-45 минут и оставить еще на 30 минут.
  6. Промыть теплообменник под проточной водой, удалив весь шлам и остатки накипи.
  7. При необходимости процесс повторить
  8. Установить теплообменник на место
  9. Собрать и подключить котел

Установка магнитной обработки воды

Если в процессе эксплуатации котла или при его покупке вы приняли решение, что хотите установить перед котлом систему безопасности от накипи, рекомендуем обратить внимание на магнитную обработку воды. Ее преимущество заключается в том, что это недорогая и абсолютно рабочая система, которая не оказывает вредного влияния на окружающую среду, легко монтируется в трубопровод, не требует замены картриджей, и не дает солям жесткости откладываться на теплообменнике и трубах.

Принцип магнитной обработки воды основан на воздействии высокоградиентного магнитного поля на способность содержащихся в воде, в составе гидрокарбонатов ионов кальция, магния, образовывать твердый нерастворимый осадок в толще воды. Без магнитной обработки воды, образующийся в процессе нагрева нерастворимый осадок карбоната кальция, магния осаждается на границе раздела твердой и жидкой фазы (т.е. на стенках теплообменников, тэнов, трубах).

Благодаря магнитной обработке происходит процесс образования в толще воды «затравочных» кристаллов, которые являются центрами кристаллизации для всех последующих соединений карбоната кальция. Выпадение осадка переносится с границы раздела фаз в толщу воды. Также молекулы карбоната кальция теряют способность слипаться в крупные комплексы и находятся в толще воды в виде мельчайшей, невидимой невооруженным глазом взвеси.

В зависимости от химического состава воды и правильности подобранного оборудования вы можете полностью или частично избавиться от образования нового налета. Также магнитная обработка воды, с течением времени, размывает уже существующий налет, делая его рыхлым и легкоудаляемом при промывке системы.

Проверить работоспособность магнитного преобразователя воды вы можете, вскрыв котел до и через полгода-год после установки.

Магнитный преобразователь воды не является панацеей и не дает 100% эффекта на любой воде, как и ни один другой бытовой фильтр не способен дать 100% эффекта в реальных условиях. Однако в 80% случаев вы получите уверенный результат уменьшения или полного исключения образования накипи и поставленная задача будет решена. В итоге срок службы вашего котла будет продлен и проблем, а также поломок из-за жесткой воды не произойдет.

Магнитный преобразователь воды НакипOFF вы можете приобрести на нашем сайте или в розничных магазинах вашего города.

Как видите, самостоятельная промывка теплообменник от накипи возможна в домашних условиях и не является таким уж страшным делом. Более того, этот процесс можно сделать легче и реже с помощью применения средств предварительной подготовки воды, таких как антинакипные магнитные преобразователи или фильтры ионного обмена.

Процедуры очистки колонок — ShodexHPLC.com

Категория Имя столбца Процедура очистки колонны
ОПК
Очистка
CLNпак ЭВ Переверните колонку в системе ВЭЖХ,
пропустите элюент со скоростью 80% от обычной скорости потока. Это эффективно для
посторонних веществ, оставшихся в колонке, но неэффективно для
веществ, адсорбированных на насадочном материале.
CLNпак ПАЭ
Обратная фаза,

Гидрофильное взаимодействие

и нормальная фаза

(на полимерной основе)

Асахипак ОДП, К8П, К4П Поток 50 мл диоксана, CH 3 CN
или метанола.
RSpak РП18, ДС
RSpak DE, ГОЛЬФ

КАРБЕЛЬ

RSpak ДМ-614 Flow 50 мл метанола, CH 3 CN
или H 2 O.
RSpak НН Введите от 20 до 50 мкл 2 н. водного раствора азотной кислоты
два или три раза.
Асахипак Нх3П-50 4Э (Стандартная очистка)
Изменение направления и скорость потока 0.5 мл/мин.
1) H 2 O 10 мин, 2) 0,1 М водн. NaOH 120 мин, 3) H 2 O 20 мин, 4) Элюент 60 мин
(Очистка ионов металлов)
Измените направление и скорость потока 0,5 мл/мин.
1) H 2 O 10 мин, 2) 0,1 М HClO 4 водн. 60 мин, 3) H 2 O 10 мин, 4) 0,1 М вод. 120 мин, 5) H 2 O 20 мин, 6) Элюент 60 мин
Обратная фаза,

Гидрофильное взаимодействие

и нормальная фаза

(на основе кремнезема)

ОДСпак Ф Поток 50 мл диоксана, ТГФ, CH 3 CN
или метанола.
Силикагель К18М, К18П
Силикапак Е-411 Поток по 50 мл н-гексана, дихлорэтана,
метанола, дихлорэтана и н-гексана.
Кремнезем 5СИЛ
Силикагель 5C8, 5C4,
5CN
Поток 50 мл диоксана, CH 3 CN
или метанола.
Силикагель 5НХ Нет подходящего метода стирки.
Силикагель 5НПЭ
Силикагель 5ПИЕ
Хиральный
Разделение
ОРпак ЦДА, ЦКБ, ЦКЗ Нет подходящего метода очистки.
ОРпак CDBS, CRX Нет подходящего метода очистки.
Ионный обмен AXпак WA-624 Введите от 1 до 2 мл 0.1М водный раствор NaOH
или 30% водный раствор уксусной кислоты. Подсоедините колонку в обратном порядке
и пропустите элюент со скоростью 0,5 мл/мин.
CXpak П-421С
МЭК КК, ДЭАЭ

СП, СМ

МЭК ДЕАЭ3Н-4Т

СП-420Н

Несколько раз введите 500 мкл 0,1 М водного раствора NaOH,
50 % водного раствора муравьиной кислоты, 20 % CH 3 CN водного раствора
или 20 % водного раствора диметилсульфоксида.Поток
элюента со скоростью от 0,3 до 0,5 мл/мин.
Асахипак ЕС-502Н Проточный водный раствор с высокой концентрацией солей
или 10 мМ водный раствор NaOH для ионной адсорбции и 50 мМ буферный раствор
, содержащий 50% CH 3 CN или метанол для гидрофобной
адсорбции.
Асахипак ЭС-502С Проточный водный раствор с высокой концентрацией соли
или 0,1 н. водный раствор уксусной кислоты для ионной адсорбции и 50 мМ буферный раствор
, содержащий 50% CH 3 Водный раствор CN или метанол для гидрофобной адсорбции
.
Гидрофобный HIC РН-814 Переверните колонку в системе ВЭЖХ, пропустите элюент
со скоростью 0,5 мл/мин и несколько раз введите от 1 до 2 мл 0,1 М NaOH или 30% водного раствора уксусной кислоты
.
Родство АФпак 31 вид Переверните колонку в системе ВЭЖХ, пропустите соответствующий элюент
со скоростью 0,5 мл/мин.
Лигандный обмен САХАР SC1011, 1821
SC1211
(для SC1011, 1821)

Поток 50мл 0.1M Ca(NO 3 ) 2 водный раствор при 50°C, 0,5 мл/мин.

(для SC1211)

После полной замены растворителя в колонке на H 2 O,
поток 30 мл 0,1 М водного раствора Ca(NO 3 ) 2 при 50°C, 0,5 мл/мин. Затем полностью замените растворитель в колонке на
H 2 O и постепенно увеличивайте концентрацию органического растворителя
до используемой концентрации.

САХАР СП0810 Поток H 2 O при 70–95 °C, 0.5 мл/мин. Затем введите 50 мкл 0,2 М водного раствора Pb (NO 3 ) 2 3 или 4 раза.
САХАР КС-800 Поток 10 мМ водного раствора NaOH со скоростью 0,5 мл/мин.
После протекания растворителя полностью замените растворитель в колонке на
H 2 O. (Иногда будет достаточно введения 40 мкл 0,1 М водного раствора
NaOH.)
RSpak DC-613 Поток 50 мл метанола, этанола, CH 3 CN или 5 мМ водного раствора NaOH.Или введите от 20 до 50 мкл 0,5 М водного раствора NaOH.
САХАР СЗ5532 После полной замены растворителя в колонке
на H 2 O, поток 30 мл 0,1 М водного раствора Zn(NO 3 ) 2 при 50°C, 0,5 мл/мин. Затем полностью замените растворитель в колонке на
H 2 O и постепенно увеличивайте концентрацию органического растворителя
до используемой концентрации.
УСПпак МН-431 Поток 50мл 0.1M Ca(NO 3 ) 2 водный раствор при 50°C, 0,5 мл/мин.
Исключение ионов САХАР Ш2011,1821 Поток 50 мл 25 мМ H 2 SO 4 водный раствор при 50°C, 0,5 мл/мин.
RSpak КС-811 Поток 50 мл 25 мМ H 2 SO 4 водный раствор при 50°C, 0,5 мл/мин.
Ионная хроматография ИЦ И-524А – Загрязнение путем накопления металлов –

30 минут: 0.01M винная кислота (ph от 4 до 4, отрегулировать с помощью 0,1M NaOH), 1,0 мл/мин

– Загрязнение белками –

150 минут: 20% водн. уксусная кислота, 0,2 мл/мин

150 минут: вода, 0,2 мл/мин

– Загрязнение органикой –

150 минут: 20% ацетонитрил/вода, 0,2 мл/мин

150 минут: вода, 0,2 мл/мин

ИС НИ-424 Поток смеси элюент/метанол = 90/10 при
0,6 мл/мин в течение двух часов.
ИС Y-521 Несколько раз введите 100 мкл 1M водного раствора HNO 3 .
ИС ИК-421 Поток 50 мл 50 мМ водного раствора винной кислоты
или 50 мМ водного раствора винной кислоты/CH 3 CN=50/50
при 0,3 мл/мин.
ИС ИС-50 Поток 50 мл 4 мМ водного раствора метансульфоновой кислоты
/CH 3 CN=70/30
при 1,0 мл/мин.
ИС СИ-90 –Загрязнение низковалентными гидрофильными ионами–

1. 15 минут: деионизированная вода

2.60 минут: 10-кратный концентрированный элюент

3. 15 минут: деионизированная вода

4. 60 минут: элюент

– Загрязнение высоковалентными гидрофобными ионами –

1. 15 минут: деионизированная вода

2. 10 минут: 5% водный раствор ацетонитрила

3. 60 минут: 100% ацетонитрил

4. 30 минут: деионизированная вода

5. 60 минут: элюент

ИС СИ-50 –Загрязнение низковалентными гидрофильными ионами–

(расход 0.3 мл/мин)

1. 25 минут: деионизированная вода

2. 100 минут: 10-кратная концентрация элюента

3. 25 минут: деионизированная вода

4. 100 минут: элюент

– Загрязнение высоковалентными гидрофобными ионами –

(скорость потока 0,3 мл/мин)

1. 25 минут: деионизированная вода

2. 20 минут: 5% водный раствор ацетонитрила

3. 100 минут: 100% ацетонитрил

4. 50 минут: деионизированная вода

5.100 минут: элюент

ИС Т-521 Поток 0,1 М водного раствора NaOH при
0,5 мл/мин в течение одного часа и 0,1 М водного раствора азотной кислоты со скоростью 0,5 мл/мин в течение одного часа.
ИС Р-621
Водный SEC (GFC) ОНпак Штаб-квартира SB-800
Переверните колонку в системе ВЭЖХ,
пропустите элюент со скоростью 50% от обычной скорости потока. Это эффективно для
посторонних веществ, оставшихся в колонке, но неэффективно для
веществ, адсорбированных на насадочном материале.
СБ400
БЕЛОК кВт-800
кВт400
Мальтимод Асахипак GS-HQ
Водный/органический SEC Асахипак GF-HQ
Органические вещества SEC
(GPC)
ОПК KF-800
KF-400HQ
KF-600
K-800
KD-800
LF
HFIP-800
HFIP-600
HT-800
UT-800
AT
AT

Промывочные колонки для ионной хроматографии: SHIMADZU (Shimadzu Corporation)

В ответ на частые запросы на этой странице описывается метод промывки колонок, используемых для ионной хроматографии, и соответствующие меры предосторожности.

Промывка колонки, используемой для ионной хроматографии, главным образом направлена ​​на удаление поливалентных ионов и органических соединений. Использование ионов с высокой элюирующей способностью или повышение концентрации ионов эффективно для смывания поливалентных ионов. И наоборот, водный раствор, содержащий органический растворитель, эффективен для смывания органических соединений. Однако концентрация ограничена используемой колонкой.

Примечание. Показанный здесь метод промывки не гарантирует восстановления производительности колонки.

(1) Общие элементы
Чтение общих элементов независимо от используемого столбца.
(2)Прокладка IC-A1
(3)Прокладка IC-A3
(4)Прокладка IC-SA2/SA3
(5)Прокладка IC-C1
(6)Прокладка IC -C3
(7) Пакет прокладок IC-SC1
(8) Пакет прокладок IC-C4

(1) Общие элементы читаются независимо от используемого столбца.

Методы, расход, время
 

  • Промойте колонку, прокачав жидкость насосом .Однако только при анализе щелочных металлов с помощью IC-C1 промывку можно выполнять, многократно вводя промывочный раствор из инжектора при перекачивании элюента.
  • Если не указано иное, используйте для промывки примерно половину нормальной скорости потока анализа или 0,5 мл/мин. Давление в колонке может увеличиваться в зависимости от типа загрязнения колонки и промывочного раствора. В этом случае уменьшите расход, чтобы давление не превышало давление при нормальной работе.
  • Если не указано иное, используйте время промывки от 1 до 2 часов .

Промывка защитной колонки
Методы промывки аналитических колонок, описанные ниже, можно также непосредственно применять к соответствующим защитным колонкам. Однако это может привести к обратным результатам из-за накопления материала на защитной колонке, который может загрязнить аналитическую колонку при промывании защитной колонки. Поэтому рекомендуется промывать аналитическую колонку и защитную колонку отдельно.

Метод подавителя
Чтобы предотвратить попадание раствора для промывки колонки в подавитель, примите соответствующие меры, например подсоедините прямую трубу от выхода колонки к сливной бутыли перед промывкой методом подавителя.
По той же причине пропустите элюент через колонку после промывки, чтобы смыть весь промывочный раствор перед подключением подавителя.

Направление жидкости через колонку
Как правило, промывочный раствор пропускают через колонку в «нормальном» направлении, используемом во время анализа. Перекачивание промывочного раствора в «обратном» направлении может привести к ухудшению работы колонки.
Однако, поскольку загрязняющие вещества обычно накапливаются вблизи входа в колонку, эффективная промывка иногда достигается за счет перекачки промывочного раствора в направлении, обратном направлению потока во время анализа. Обратите внимание, что перекачивание промывочного раствора в «обратном» направлении может значительно изменить состояние насадки колонки и вызвать ухудшение ее производительности. (За исключением случаев, когда промывка в обратном направлении явно указана в руководстве по эксплуатации.)

Эффекты промывки колонки
Выполняйте промывку колонки только при необходимости. Слишком частое использование промывочного раствора с другим составом может изменить свойства набивки, что приведет к снижению производительности и повышению давления.

Жидкость в колонке во время хранения
Хранение до 1 месяца: Заполните колонку подвижной фазой, используемой для анализа.
Хранение более 1 месяца: заменяйте подвижную фазу в колонке каждый месяц

 

Колонки для жидкостной хроматографии (ЖХ) Restek — рекомендации по очистке

Обзор

Restek настоятельно рекомендует использовать защитные колонки для защиты ваших аналитических колонок для ЖХ с обращенной фазой и нормальной фазой как от закупорки фриттой, так и от загрязнения колонки.Однако со временем, даже при соблюдении этой меры предосторожности, ваша колонка для ЖХ может засориться или загрязниться сильно адсорбированными компонентами пробы. Если вы наблюдаете снижение производительности колонки, повышенное противодавление или другие признаки блокировки или загрязнения колонки, следующие этапы регенерации колонки для ВЭЖХ могут помочь восстановить вашу колонку.

Этот протокол распространяется на следующие колонки Restek LC:

Обратная фаза: Нормальная фаза:
Бифенил Амино
С1–С18 Циано
ИБД Силикагель
ПАУ  
ПФП Пропил  
Quat  

Для помощи в очистке колонок Restek LC, не перечисленных выше, обратитесь в службу технической поддержки.

Очистка и регенерация колонок ЖХ

  1. Для колонок для ВЭЖХ (3, 4 и 5 мкм) сначала отключите любой поток, а затем отсоедините колонку от инжектора и детектора. Измените направление потока колонки, подключив выходной конец колонки к элюенту насоса. Для колонок УВЭЖХ (1,9 мкм), НЕ ПЕРЕВЕРТАТЬ КОЛОНКУ. Вместо этого промойте колонку в соответствии с направлением, указанным стрелкой на самой колонке.

    Рисунок 1:  Направление потока указано на этикетке колонки.

  2. Промойте колонку, используя последовательность растворителя (таблица I) и скорость потока (таблица II), указанные для вашей конкретной колонки.

    Таблица I: Последовательности растворителей для промывки колонок Restek LC

    ПРИМЕЧАНИЕ. Промойте колонку минимум 20 объемами колонки каждого растворителя в указанном порядке. Объем колонки можно оценить по формуле: V = ∏ r 2 л, где V = объем колонки в мл, r = радиус колонки в см и L = длина колонки в см.

Колонки с обращенной фазой Колонки с нормальной фазой
1. Вода:Метанол (95:5, об./об.) 1. Изопропиловый спирт
2. Метанол 2. n -Гексан
3. Изопропиловый спирт 3. Этанол
4. n -Гексан 4. Вернитесь к исходной мобильной фазе
5.Изопропиловый спирт  
6. Метанол  
7. Вода:Метанол (95:5, об./об.)  
8. Вернитесь к исходной мобильной фазе  

 

Таблица II: Скорость потока для промывки колонок Restek LC

Внутренний диаметр колонки (мм) Скорость потока (мкл/мин)
1.0 25
2.1 100
3,0/3,2 250
4,6 500

 

Хранение колонок ЖХ

Во избежание контаминации храните колонки для ЖХ с надежно закрепленными заглушками и обязательно указывайте информацию о растворителе для хранения.

Для краткосрочного хранения все колонки для ВЭЖХ следует промыть растворителем, состав которого идентичен последней использованной подвижной фазе, за исключением любых буферных, кислотных или основных компонентов.

Для длительного хранения колонки для ВЭЖХ с обращенной фазой следует хранить с 50 % воды/50 % органического растворителя (например, ацетонитрила или метанола). Колонки для ВЭЖХ с нормальной фазой следует хранить с неполярным растворителем (например, гексаном).

Забудьте о химчистке. Вот как постирать (почти) всю одежду дома.

Джоли Керр — эксперт по уборке и обозреватель советов. Она будет здесь каждую неделю и поможет ответить на ваши самые грязные вопросы, а раз в месяц она поможет сотрудникам Esquire решить их самые неприятные проблемы с уборкой.Ты грязный? Напишите ей по электронной почте . Ты все еще грязный? Подпишитесь на Ask a Clean Person: The Podcast на Acast , iTunes или Stitcher , а также на Ask a Clean Person на Facebook 900


Есть ли шпаргалка, чтобы узнать, какая одежда, предназначенная только для сухой чистки, будет *вероятно* подходящей, если вы просто стираете ее, как и другую одежду? — Сэмми Николлс , редактор вечеров и выходных

Нет, Дорогой Сэмми! Но это будет, потому что я собираюсь сделать тебя одним.

Прелесть этого вопроса в том, что он приходит сразу после нашего самого первого вопроса сотрудника Esquire о том, как избавить себя от похода в химчистку, стирая классические рубашки дома. Я закрыл эту колонку, затронув идею использования состава ткани для информирования о выборе стирки. «Эта тема, — писал я, — заслуживает отдельной колонки, и она определенно есть в расписании редактирования, но поскольку мы здесь говорим о химчистке, я думаю, что стоит отклониться от темы, чтобы поговорить о метках ухода и о том, что нужно делать. делать с информацией, которую вы можете найти на них.»

И вот мы здесь, даем этой теме отдельную колонку. Поскольку вы просили шпаргалку, я собираюсь сделать большую часть этого в виде пули.

Понимание состава ткани сделает вас свободными

Если вы читали колонку о стирке классических рубашек в домашних условиях, у вас уже есть представление о том, что будет дальше, но в качестве переподготовки: не утруждайте себя теми непостижимыми рунами по уходу за тканью, которые появляются на ярлыках по уходу. Выполняйте , однако, найдите время, чтобы найти одну часть информации, которую можно найти внутри: состав ткани.

Когда у вас будет эта информация, вы можете сделать перекрестные ссылки в этой шпаргалке о свойствах различных тканей в отношении стирки.

  • Хлопок хорошо стирается, но поскольку он склонен к усадке, его нельзя подвергать воздействию горячей воды или сушки при высокой температуре. Машинная или ручная стирка в холодной воде и сушка тонкого хлопка на воздухе.
  • Лен , как и хлопок, легко стирается, но также склонен к усадке. Машинная или ручная стирка белья в холодной воде и сушка на воздухе или отжим сразу после стирки.Поскольку лен также имеет тенденцию мяться, как сука (это технический термин, который мы используем в бизнесе) (хорошо, хорошо, что это не так), подумайте о том, чтобы отгладить льняную одежду сразу после стирки, как мы говорили о ваших классических рубашках.
  • Нейлон также можно стирать в машине. Однако он, вероятно, станет довольно статичным. Однако об этом позаботится развешивание нейлоновой одежды для сушки на воздухе, так как в сушилке может накапливаться статическое электричество.
  • Полиэстер полностью пригоден для машинной стирки.Вам придется потрудиться, чтобы испачкать свои шмотки из полиэстера. Сушка на воздухе, однако, всегда была отличной идеей.

Гетти Изображения

  • Вискоза и вискоза подобны могваю в том смысле, что обе ткани не должны подвергаться воздействию воды. Всегда сдавайте одежду из искусственного шелка и вискозы в химчистку.
  • Шелк красив и темпераментен, очень склонен к потере цвета и окрашиванию водой.Я бы ни капельки не винил вас, если бы вы передали заботу о нем на аутсорсинг. Но если вы хотите взять дело в свои руки, шелк можно стирать вручную в прохладной воде, используя средство для стирки шелка, такое как Le Blanc Silk & Lingerie Wash. Важно знать о шелке то, что он не любит длительного воздействия. водой, поэтому мытье рук должно быть быстрым, не более пяти минут от начала до конца.
  • Спандекс можно стирать в машине, но он ненавидит хлорный отбеливатель.
  • Шерсть (включая кашемир, ангору, мохер и т. д.) Волокна, вероятно, будут сваляться, т. е. спутываться и садиться, при стирке. Есть две основные причины возникновения валяния: волнение и воздействие колебаний температуры воды. Учитывая это, шерстяные изделия лучше стирать вручную, а не в машине, в прохладной воде. Чтобы узнать больше о стирке и уходе за шерстью, ознакомьтесь с моим руководством по уходу за свитером.

Небольшое примечание о смесовых тканях: если вы сомневаетесь, следуйте инструкциям для более темпераментной ткани.Итак, если у вас есть предмет одежды из хлопка и спандекса, следуйте правилам для спандекса.

Когда отдавать работу на аутсорсинг

Я люблю говорить, что когда дело доходит до чистки или ухода за тканью, гораздо важнее знать, что делать , а не , чем знать, что делать. При этом, вот краткое изложение типов одежды — и недостатков, которые могут испортить их прекрасный внешний вид — которые обычно следует отправлять на профессиональную или специальную чистку.

  • Если предмет одежды украшен, т. е. украшен бисером, пайетками, сложной вышивкой и т. д.
  • Если в состав ткани предмета одежды входит искусственный шелк или вискоза.
  • Если на шелке есть стойкие или загадочные пятна.
  • Если происхождение пятна неизвестно и/или появилось со временем.
  • Если предмет одежды объемный, например, шерстяное зимнее пальто.

Гетти Изображения

Что нужно знать о руке против.Машинная стирка

Когда дело доходит до стирки в домашних условиях одежды, предназначенной только для сухой чистки, лучшим выбором всегда будет ручная стирка. Но машинная стирка также возможна, особенно для менее капризных тканей, таких как хлопок или полиэстер. Если вы предпочитаете машинную стирку, вот несколько вещей, которые нужно сделать, чтобы сделать процесс стирки как можно более бережным для вашей особенной одежды.

  • Температура воды : Выберите холодную воду.
  • Длина цикла : Если ваша стиральная машина позволяет установить продолжительность цикла, т.е.е. количество времени, в течение которого машина будет работать, выберите самый короткий цикл.
  • Скорость цикла : Скорость цикла, то есть скорость и сила, с которой барабан движется во время циклов стирки и отжима, на разных машинах называется по-разному. Чаще всего вы увидите скорость цикла, выраженную как «обычная» (циклы быстрой стирки и отжима), «постоянная стирка» (быстрая стирка, медленный отжим) и «деликатная» (медленная стирка и отжим) или как «быстрая/ быстро», «быстро/медленно» и «медленно/медленно». «Нежный» или «медленный/медленный» — это то, что вам нужно.
  • Смесь для стирки : когда дело доходит до стирки деликатных вещей, стирайте одно и то же и избегайте смешивания тяжелых вещей, таких как полотенца, джинсы или толстовки, с тонкими хлопковыми, льняными, шерстяными или шелковыми вещами. Спандекс и другие эластичные предметы одежды не следует стирать с чрезмерно ворсистыми изделиями, такими как флис или махровая ткань.
  • Сушка : Воздушная сушка. Полная остановка.

Этот контент создается и поддерживается третьей стороной и импортируется на эту страницу, чтобы помочь пользователям указать свои адреса электронной почты.Вы можете найти дополнительную информацию об этом и подобном контенте на сайте piano.io.

%PDF-1.7 % 1030 0 объект > эндообъект внешняя ссылка 1030 103 0000000016 00000 н 0000003284 00000 н 0000003479 00000 н 0000003516 00000 н 0000004928 00000 н 0000005011 00000 н 0000005167 00000 н 0000005308 00000 н 0000005449 00000 н 0000005590 00000 н 0000005731 00000 н 0000005871 00000 н 0000006011 00000 н 0000006679 00000 н 0000007314 00000 н 0000007366 00000 н 0000007481 00000 н 0000007747 00000 н 0000008316 00000 н 0000008945 00000 н 0000009213 00000 н 0000016518 00000 н 0000024158 00000 н 0000031713 00000 н 0000038854 00000 н 0000046139 00000 н 0000053598 00000 н 0000061628 00000 н 0000068921 00000 н 0000085641 00000 н 0000099115 00000 н 0000099179 00000 н 0000099999 00000 н 0000100077 00000 н 0000100153 00000 н 0000100252 00000 н 0000100403 00000 н 0000100720 00000 н 0000100777 00000 н 0000100895 00000 н 0000100973 00000 н 0000101290 00000 н 0000101347 00000 н 0000101465 00000 н 0000101543 00000 н 0000101861 00000 н 0000101918 00000 н 0000102036 00000 н 0000102114 00000 н 0000102429 00000 н 0000102486 00000 н 0000102604 00000 н 0000102682 00000 н 0000102999 00000 н 0000103056 00000 н 0000103174 00000 н 0000103252 00000 н 0000103571 00000 н 0000103628 00000 н 0000103746 00000 н 0000103824 00000 н 0000104141 00000 н 0000104198 00000 н 0000104316 00000 н 0000112836 00000 н 0000112877 00000 н 0000145446 00000 н 0000145487 00000 н 0000178056 00000 н 0000178097 00000 н 0000210666 00000 н 0000210707 00000 н 0000243276 00000 н 0000243317 00000 н 0000275886 00000 н 0000275927 00000 н 0000308496 00000 н 0000308537 00000 н 0000308615 00000 н 0000308727 00000 н 0000308995 00000 н 0000309073 00000 н 0000309263 00000 н 0000309341 00000 н 0000309531 00000 н 0000309609 00000 н 0000309799 00000 н 0000309877 00000 н 0000310067 00000 н 0000310145 00000 н 0000310334 00000 н 0000310412 00000 н 0000310601 00000 н 0000322455 00000 н 0001622510 00000 н 0001622621 00000 н 0001622732 00000 н 0001622843 00000 н 0001622954 00000 н 0001623065 00000 н 0001623176 00000 н 0000003082 00000 н 0000002404 00000 н трейлер ]/Предыдущая 2887491/XRefStm 3082>> startxref 0 %%EOF 1132 0 объект >поток hвязьQ]hRa~s5҈b;4Y6(>d3V7 #AѠfXJh#.Ээ~.z{{\%}?

Почвоведение: сделайте колонку Виноградского Новости и исследования

Ключевые концепции
Микроорганизмы
Почва
Биология
Кислород
Солнечный свет
Экосистема

Введение
Наша планета перерабатывает и повторно использует все, что необходимо для поддержания жизни. Это удивительная гигантская система рециркуляции, называемая биогеохимическим циклом. На самом деле вы можете смоделировать это в небольшом масштабе, используя пластиковую бутылку и глину, чтобы построить так называемую колонну Виноградского.В этом упражнении вы построите свои собственные столбцы Виноградского и исследуете, как включение различных питательных веществ влияет на то, какие почвенные микроорганизмы процветают, а какие нет.

Фон
Чтобы жить и расти, организмам нужны определенные питательные вещества поблизости, чтобы они могли есть — так же, как и мы. Большинство этих питательных веществ непрерывно перемещаются в биогеохимическом цикле, который транспортирует питательные вещества и другие химические вещества через живые и неживые части Земли — например, железо, которое когда-то находилось в горных породах, может позже попасть в почву, где оно может быть поглощено растение, а затем поедается животным.Биогеохимический цикл представляет собой замкнутую систему, что означает, что питательные вещества не теряются и не создаются; они постоянно повторно используются и перерабатываются.

В данной экосистеме может происходить несколько биогеохимических циклов. Некоторыми важными питательными веществами, которые перерабатываются через экосистему, являются кислород, углерод и сера. Различные почвенные микробы играют ключевую роль в переработке этих и других питательных веществ. Инструмент, изобретенный микробиологом Сергеем Виноградским для изучения этих процессов, представлял собой длинную герметичную колонку илистой почвы, которая теперь называется колонкой Виноградского.Внутри одного из них формируются различные градиенты. Например, со временем в верхней части колонны становится больше кислорода, чем в нижней. Эти градиенты влияют на то, где в колонке могут жить разные микробы.

Материалы
• Четыре чистые пластиковые бутылки с водой по 500 миллилитров каждая. Лучше всего подойдут бутылки с гладкими стенками (не ребрами), более высокие и узкие по форме.
• Ножницы
• Нож (дополнительно)
• Перманентный маркер
• Линейка
• Резиновые сапоги и старая одежда, которая может испачкаться (по желанию)
• Доступ к мутному ручью, пруду, озеру или болоту
• Перчатки
• Лопата или мастерок
• Два ведра
• Газета или обычная бумага (измельченная)
• Яйцо
• Две чаши
• Две большие миски для смешивания
• Мерный стакан
• Палочка широкая, для упаковки грязи в бутылки
• Мерная ложка
• Регулируемая настольная лампа с компактной люминесцентной лампой мощностью 13 Вт (дополнительно)
• Пустая поверхность, например, на парте или столе, имеющая теплую комнатную температуру (около 72–78 градусов по Фаренгейту).На него не должны попадать прямые солнечные лучи, но если вы не используете настольную лампу, место должно находиться рядом с очень солнечным окном.
• Полиэтиленовая пленка
• Пластиковые мешки для мусора или пакеты для продуктов
. • Четыре резинки
• Картонная коробка или коричневый бумажный пакет
• Фонарик

Подготовка
• Снимите все обертки с ваших четырех бутылок с водой, насколько это возможно.
• Аккуратно срежьте крышки с бутылок. Для этого вам могут понадобиться ножницы и нож, а взрослому может понадобиться помощь.Отрежьте верхнюю часть прямо там, где бутылка начинает изгибаться внутрь ближе к вершине. Сохраните отрезанные верхушки, чтобы использовать их в качестве воронок позже.
• С помощью перманентного маркера сделайте небольшую отметку в том месте, где ваша бутылка будет заполнена примерно на 85 процентов. Например, если высота вашей бутылки шесть дюймов, вы должны сделать отметку примерно в пяти дюймах от дна. Вы наполните бутылки до этого уровня грязью.
• Пометьте каждую бутылку тем, что будет добавлено в ее грязь. В один будет добавлена ​​газета, в один будет добавлен яичный желток, а в два будет добавлена ​​только обычная грязь (без добавления чего-либо).Одна из простых бутылок будет храниться в темноте, остальные три бутылки будут подвергаться воздействию света.
• Соберите немного грязи из мутного ручья, пруда, озера или болота. Будьте осторожны в воде и всегда под присмотром взрослых. (Возможно, вы сначала наденете резиновые сапоги и старую одежду, которая может испачкаться.) Наденьте перчатки и наполните одно ведро примерно от половины до одного галлона грязи, зачерпывая ее в основном из-под поверхности воды.
• В другое ведро наберите немного воды (максимум полгаллона) из того же места.
• Принесите свои ведра домой и при необходимости идите мыть посуду! (Пока вы их не используете, держите ведра в тени, чтобы они не нагревались слишком сильно.)

Процедура
• В миске нарежьте примерно четверть листа газеты или обычной бумаги на тонкие полоски, а затем нарежьте полоски на крошечные прямоугольники. Они будут источником углерода для микробов в грязи. Как вы думаете, как повлияет добавление углерода на микробы, которые растут в колонке Виноградского?
• Во вторую миску добавьте яичный желток (сырой или сваренный вкрутую).Если он сваренный вкрутую, растолочь желток в пюре. Если оно сырое, не забудьте вымыть руки после контакта с ним, так как сырые яйца могут содержать бактерии сальмонеллы. Желток будет источником серы для микробов в грязи. Как вы думаете, как повлияет добавление серы на микробы, которые растут в колонке Виноградского?
• Наденьте перчатки и возьмите ведро с грязью. Помешивая, медленно добавляйте собранную воду в почву, пока смесь не станет похожа на молочный коктейль.Также во время перемешивания обязательно вытащите из грязи все палочки, листья и камни.
• В большой миске смешайте чуть больше двух чашек грязи и примерно одну треть яичного желтка. Используя отрезанную крышку от бутылки в качестве воронки, налейте примерно один дюйм грязи, смешанной с яичным желтком, в бутылку с надписью «с добавлением яичного желтка». Постучите бутылкой по твердой поверхности, чтобы утрамбовать грязь, и используйте широкую палку, чтобы еще больше утрамбовать грязь. Продолжайте добавлять примерно один дюйм грязи за раз и утрамбовывать ее, пока не достигнете 85-процентной отметки, которую вы сделали.Отложите бутылку в сторону.
• В другой большой миске смешайте чуть больше двух чашек грязи из ведра (смешайте еще раз, если вода осела) и одну чайную ложку измельченной газеты или бумаги. Используя отрезанную горлышко бутылки в качестве воронки, наливайте и набивайте примерно один дюйм грязи за раз в бутылку с правильной маркировкой, пока не дойдете до отметки 85 процентов. Отложите бутылку в сторону.
• Возьмите две оставшиеся бутылки, на которых вы должны были пометить, что они содержат простую грязь. Налейте в две бутылки воронку и заполните грязью прямо из ведра с грязью (повторно перемешайте, если вода осела), пока они не будут заполнены на 85 процентов.
• После 30-минутного стояния вода должна быть на уровне 0,2–0,8 дюйма поверх грязи в каждой бутылке. Аккуратно добавьте больше воды или удалите немного по мере необходимости. Оставьте не менее 0,2 дюйма свободного пространства вверху.
• Найдите пустую плоскую поверхность, например стол или столешницу, при комнатной температуре (около 72–78 градусов по Фаренгейту). На него не должны попадать прямые солнечные лучи. Если вы не используете настольную лампу, место должно находиться рядом с очень солнечным окном. Накройте поверхность полиэтиленовыми пакетами для мусора или продуктовыми пакетами, чтобы защитить ее.
• Аккуратно переместите бутылки на поверхность, стараясь не расплескать их! Накройте каждую бутылку полиэтиленовой пленкой, закрепив ее резинкой. Теперь ваши колонки Виноградского готовы к тестированию!
• Если вы не используете настольную лампу, расположите три колонны Виноградского (которые будут получать свет) так, чтобы они получали много света, но не подвергались воздействию прямого света. Если вы используете лампу, расположите три столбца так, чтобы они находились на расстоянии 20 дюймов от лампочки.Для тех бутылок, которые освещаются лампой, напишите маленькую букву «L» на сторонах бутылок, обращенных к лампе. Как вы думаете, что произойдет на сторонах, обращенных к свету?
• Установите колонку Виноградского с простым илом, который не пропускает свет на поверхность при комнатной температуре. Затем либо положите на колонку перевернутую картонную коробку, либо положите ее в коричневый бумажный пакет, чтобы на бутылку не попадал свет. Как вы думаете, что произойдет в столбе, который не получает света?
• В течение следующих шести-восьми недель оставьте колонки Виноградского там, где вы их установили.Если вы используете его, держите настольную лампу включенной 24 часа в сутки. (Если пластиковая крышка оторвалась, просто закрепите ее снова резинкой.) Раз в неделю наблюдайте за колонками, наблюдая за изменением их цвета. Каждая область окрашивания должна представлять собой группу однотипных микробов. Наблюдая за колоннами, попробуйте выключить свет и посветить на колонны ярким фонариком — это поможет вам лучше видеть цвета. Какие цвета вы видите в столбцах? Где в колонках они появляются? Чем колонки отличаются друг от друга? Видите ли вы червей, креветок, улиток или других более крупных организмов в колонках? Как столбцы меняются со временем? Как вы думаете, какое отношение ваши результаты имеют к тому, что было добавлено (или не добавлено) в столбцы?
• Совет. Через одну-две недели в некоторых столбцах должно появиться зеленое окрашивание.Возможно, вам придется внимательно присмотреться к нему. Если вы не видите зеленой окраски, возможно, столбцы не получают достаточно света. Вы можете попробовать переместить их ближе к источнику света.
Дополнительно: Выполните это действие еще раз, но на этот раз проверьте несколько бутылок на каждое условие. Например, испытайте три колонки Виноградского с яичным желтком. Насколько воспроизводимы ваши результаты? Есть ли большая разница между разными столбцами, которые были настроены одинаково?
Дополнительно: Вы можете попробовать протестировать несколько различных источников грязи или почвы, чтобы увидеть, будет ли рост микробов отличаться от места к месту.Вы даже можете попробовать пляжный песок. Как вы думаете, что ваши результаты говорят вам о качестве почвы и микробах, обитающих на каждом участке, который вы тестируете?
Дополнительно: Испытайте различные виды добавок, чтобы найти микробы, живущие в уникальных и сложных условиях. Например, вы можете тестировать увеличивающееся количество соли в серии колонок Виноградского, чтобы проверить любителей соли (называемых галофилами), или поместить колонки при разных температурах, чтобы найти микробы, которые любят тепло (возле вентиляционного отверстия) или холод (в холодильнике). . Можете ли вы выбрать микробы, живущие в более экстремальных условиях?

Наблюдения и результаты
Образовывали ли колонны, которые были на свету, участки зеленого цвета на сторонах, обращенных к свету, тогда как колонна в темноте оставалась темно-коричневой? Создавали ли три колонны, которые были на свету, цветовые узоры, которые несколько отличались друг от друга?

Со временем в колонках Виноградского должны были сформироваться градиенты различных питательных веществ.Эти градиенты влияют на то, где в колонках растут разные микробы. Например, со временем в верхней части столбца кислорода становится больше, чем в нижней, а это означает, что микробы, способные переносить кислород или вырабатывать его, окажутся наверху. Микробы, которые не переносят свободный кислород (называемые анаэробными бактериями), будут находиться ниже. Точно так же микробы, которым свет нужен для производства энергии (через фотосинтез или аналогичный процесс), должны будут жить там, где они могут получить свет в колонке.

Примерно через одну-две недели, в зависимости от того, сколько света получают столбы, на освещенных сторонах столбцов, получающих свет, должно появиться некоторое зеленое окрашивание.В основном это происходит из-за цианобактерий и водорослей, которым нужен свет. Колонка в темноте должна оставаться темно-коричневой. В колонке с яичным желтком вы, возможно, видели участки более темной зеленой, фиолетовой и/или черной окраски, которые со временем развивались у дна — эти окраски могли быть группами определенных анаэробных бактерий: зеленых серных бактерий, пурпурных серных бактерий и сульфатов. уменьшение количества бактерий соответственно. Сульфаредуцирующие бактерии фактически поедают серу и производят сероводородный газ, который поедают зеленые и фиолетовые серные бактерии.В колонке с газетой вы, возможно, видели некоторые области коричневого, оранжевого, красного или фиолетового цвета ближе к середине — эти окраски могли быть группами пурпурных несерных бактерий, которым для процветания нужен источник углерода. Возможно, вы видели червей, улиток, креветок или других мелких организмов в воде, но, вероятно, не много (если они есть) в бутылке с яичным желтком, потому что сероводород токсичен для большинства организмов!

Очистка
Обязательно мойте руки и все, что соприкасалось с сырым яйцом, потому что они могут быть переносчиками сальмонеллы.Также мойте руки после контакта с грязью. Когда вы закончите со своими колонками Виноградского, с разрешения вы можете выбросить грязь наружу (например, в компостер или обратно в грязное место).

Дополнительные материалы для изучения
Видеодемонстрация создания колонны Виноградского, от NASA Quest
Колонна Виноградского, от Microbial Life
Колонны Виноградского, от Пенсильванского государственного университета
Выращивание почвенного зверинца, от Science Buddies

91 вам в партнерстве с Science Buddies

Инструмент для увеличения срока службы хроматографических смол

Abstract

В разработке биофармацевтических процессов постоянно растет спрос на скорость, экономическую эффективность и понимание процессов.Чтобы соответствовать этому, был разработан высокопроизводительный метод проверки условий безразборной очистки (CIP) для хроматографических смол. Методология включает засорение хроматографической смолы MabSelect SuRe в 96-луночных фильтровальных планшетах, очистку загрязненной смолы путем инкубации в различных CIP-агентах и, наконец, анализ остаточных примесей на смоле после очистки. В этой статье описываются усовершенствования, которые преобразовали метод с низкой производительностью и значительным ручным вмешательством в полностью автоматизированный метод с высокой производительностью и хорошей воспроизводимостью.

Ключевые слова: биопроцесс , безразборная очистка, хроматография, высокая производительность, моноклональные антитела, разработка процесса, белок А, скрининг

Введение

хроматографическая колонка. Чтобы максимально увеличить количество циклов повторного использования колонки, требуется процедура очистки, которая эффективно удаляет примеси, не нанося вреда хроматографической смоле. Гидроксид натрия (NaOH) эффективно удаляет осажденные белки, гидрофобные белки, нуклеиновые кислоты, эндотоксины и вирусы и стал золотым стандартом для очистки и дезинфекции хроматографических смол. 1 Лиганд белка А на смоле для аффинной хроматографии для улавливания моноклональных антител (мАт) чувствителен к жестким условиям очистки, таким как высокие концентрации NaOH. Таким образом, этот тип смолы особенно выигрывает от оптимизации протокола CIP для эффективности очистки и совместимости смолы.

На производителей биофармацевтических препаратов постоянно растет давление с целью сократить время и стоимость разработки процесса. Регулирующие органы также требуют современного понимания и описания процессов.Традиционные подходы к разработке процессов требуют больших затрат времени и материалов. Таким образом, за последнее десятилетие появилось использование уменьшенных, высокопроизводительных методов для скрининга рабочих условий на протяжении всего биофармацевтического процесса. 2 Планшеты PreDictor™ представляют собой 96-луночные фильтрующие планшеты, предварительно заполненные хроматографическими смолами для определения аффинности антител, ионообменной или мультимодальной хроматографии. Планшеты PreDictor предназначены для скрининга хроматографических условий во всех частях хроматографического цикла. 3

Здесь описывается разработка высокопроизводительного метода проверки условий очистки хроматографических смол с использованием пластин PreDictor MabSelect SuRe™. MabSelect SuRe содержит стабилизированный щелочью лиганд протеина А, который обеспечивает большую стабильность, чем обычные смолы на основе протеина А, в щелочных условиях, используемых в протоколах безразборной мойки. 1 MabSelect SuRe основан на агарозе, которая устойчива в щелочных условиях, тогда как смолы на основе диоксида кремния не стабильны.Этот метод фокусируется на проверке эффективности чистящих средств при удалении белковых примесей из загрязненной хроматографической смолы. Это общий метод, который можно использовать для проверки условий очистки для других комбинаций хроматографических смол и исходных материалов, отличных от описанных здесь. Метод был разработан для оценки удаления белковых примесей, но может быть расширен для оценки эффективности очистки от других примесей. Формат планшета PreDictor можно также использовать для оценки совместимости смолы с различными чистящими средствами. 3

Использование готовых пластин (PreDictor) удобно, но не является обязательным условием для этого типа исследования. Поэтому PreDictor далее именуется просто 96-луночным фильтровальным планшетом.

Вкратце, метод проверки эффективности очистки состоит из трех частей; (1) загрязнение смолы MabSelect SuRe в 96-луночных фильтровальных планшетах с использованием собранной жидкости для культивирования клеток (HCCF) с mAb; (2) очистка смолы путем инкубации загрязненной смолы в средствах CIP и (3) анализ остаточных примесей на смоле после очистки.Этот метод постепенно совершенствовался для повышения производительности и большей автоматизации рабочих процедур, а также был скорректирован для лучшего отражения реальных процедур использования колонок. Оригинальный метод и внесенные в него улучшения описаны здесь.

Результаты

Искусственное загрязнение хроматографической смолы в 96-луночных фильтровальных планшетах.

Чтобы имитировать загрязнение, которое происходит в колонке, повторно используемой для повторных циклов, первоначально было выполнено искусственное загрязнение смолы в 96-луночных фильтровальных планшетах. 3 5

Во время процедуры искусственного обрастания смолу MabSelect SuRe в лунках фильтрующего планшета уравновешивали с помощью фосфатно-солевого буфера (PBS), а затем инкубировали в осветленном лизате E. coli с добавлением с поликлональными IgG. Загрузку лизата E. coli , обогащенного IgG, повторяли четыре раза. После последней инкубации смолу промывали PBS. Осаждающий раствор, загрязняющий агент, состоящий из соли и кислоты (2.К смоле добавляли 9 М сульфат аммония, 0,6 М фосфорную кислоту, рН 2,5) с последующей инкубацией в течение ночи. После последующей промывки и элюирования связанного IgG смолу повторно уравновешивали PBS и промывали сверхчистой водой (H 2 O) (). Загрязненную смолу затем использовали для проверки условий безразборной мойки. После очистки остаточные белковые примеси на смоле анализировали с помощью электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE).

Схематическое описание искусственного загрязнения смолы MabSelect SuRe в планшетах PreDictor.Шаги 1, 3 и 5 показывают уравновешивание или промывание PBS (20 мМ фосфат, 0,15 М NaCl, рН 7,4). На этапе 2, который повторяли четыре раза, к смоле добавляли лизат E. coli , обогащенный поликлональным IgG, и проводили инкубацию в течение 45 минут. На стадии 4 добавляли загрязняющий агент, состоящий из 2,9 М сульфата аммония, 0,6 М фосфорной кислоты, рН 2,5, с последующей инкубацией в течение ночи для ускорения загрязнения смолы. После последующей промывки связанный IgG элюировали 0,1 М цитратом натрия, рН 3.0. Смолу в лунках перемешивали на каждом этапе, а жидкость удаляли центрифугированием между каждым этапом. H 2 O, сверхчистая вода.

Оценка условий очистки.

Для оценки условий очистки загрязненную смолу инкубировали с различными очищающими химическими веществами во время смешивания на шейкере для микротитровальных планшетов со скоростью 1100 оборотов в минуту (об/мин). Использовали время инкубации 15 мин, что соответствует времени контакта CIP в колонке. Перед скринингом были подготовлены планшеты с глубокими лунками с растворами CIP в соответствии с экспериментальной установкой в ​​96-луночном фильтровальном планшете.В ходе эксперимента CIP-растворы переносили из глубоколуночного планшета в 96-луночный фильтровальный планшет с помощью 8-канальной пипетки. Можно было просматривать отдельные этапы очистки, а также последовательности из нескольких этапов очистки. Было оценено до четырех этапов очистки в последовательностях. Между каждым этапом очистки смолу промывали 300 мкл PBS с последующим промыванием 300 мкл сверхчистой воды. После последнего этапа очистки смолу трижды промывали 300 мкл PBS и три раза 300 мкл сверхчистой воды (1).

Оценка условий очистки. Различные условия очистки оценивали путем инкубации загрязненной смолы MabSelect SuRe в очищающих химикатах и ​​последовательности этапов очистки. Использовали время инкубации 15 мин, что соответствует времени контакта CIP в колонке. Между каждым этапом очистки в последовательности смолу промывали 300 мкл PBS, а затем промывали 300 мкл H 2 O. На каждом этапе выполняли перемешивание и центрифугирование для удаления жидкости между каждым этапом.

SDS-PAGE анализ остаточных белковых примесей на смоле после очистки искусственно загрязненного MabSelect SuRe.

После искусственного загрязнения к загрязненной смоле применялись восемь различных протоколов очистки с одним или двумя этапами CIP. Загрязненные и очищенные образцы смолы затем подвергали термообработке с буфером для образцов, содержащим SDS/дитиотреитол (DTT), для экстракции белковых примесей из смолы. Анализ SDS-PAGE оставшихся белковых примесей на смоле после очистки показал, что увеличение концентрации NaOH от 0.от 1 до 0,5 М приводило к уменьшению количества остаточных белковых примесей (). Смесь 0,1 М NaOH и 30% 2-пропанола несколько повысила эффективность очистки по сравнению с одним NaOH, как и двухэтапная последовательность с 0,1 М NaOH, за которой следует 0,1 М цитрат. Однако различия были небольшими, и было невозможно сказать, были ли они значительными, поскольку данные были качественными и из отдельных образцов. 0,1 М NaOH + 1,0 М NaCl приводили к значительному снижению эффективности очистки по сравнению с 0.1 М NaOH без соли. Коммерческое бытовое моющее средство (Да, Procter & Gamble) также было оценено на эффективность очистки, но это не способствовало очистке загрязненной смолы. Контрольный образец, промытый PBS, показал наличие большого количества белков на загрязненной смоле.

Уменьшенный SDS-PAGE (окрашенный Deep Purple™) для анализа белков, оставшихся на искусственно загрязненной смоле MabSelect SuRe после очистки различными агентами. Контрольный образец, промытый PBS (дорожка 1), показал наличие большого количества белков на искусственно загрязненной смоле.NaOH оказался очень эффективным при очистке, а увеличение концентрации NaOH привело к повышению эффективности очистки (дорожки 2–4). 0,1 М NaOH + 1,0 М NaCl (дорожка 7) приводили к значительному снижению эффективности очистки по сравнению с 0,1 М NaOH без соли (дорожка 2).

Сравнение подготовки проб в 96-луночном фильтровальном планшете и планшете для сбора.

Сравнивали два различных режима подготовки проб перед анализом с помощью электрофореза. Один подход заключался в подготовке образцов в 96-луночном фильтровальном планшете, где смола была искусственно загрязнена и очищена.Другой подход заключался в переносе осушенной смолы на чашку для сбора перед подготовкой образца. Остаточные белковые примеси на смоле анализировали с помощью чип-электрофореза. С точки зрения ранжирования эффективности очистки различных протоколов CIP два метода подготовки образцов дали примерно одинаковые результаты (). Однако образцы, приготовленные непосредственно в 96-луночном фильтровальном планшете, содержали значительно больше примесей по сравнению с образцами, приготовленными в собирающем планшете.Контроль (промывка PBS) содержал много примесей, как и очистка с использованием запатентованного раствора CIP. Фосфорная кислота при рН 1,6 удаляла часть выпавших в осадок белков, но еще более эффективными были 0,1 М NaOH + 1,0 М NaCl и 6,0 М гидрохлорид гуанидина. Очистка 0,1 М раствором NaOH привела к полному удалению осажденных белков, когда образец был подготовлен в планшете для сбора, тогда как после подготовки образца в 96-луночном фильтровальном планшете этот образец содержал значительное количество белков.После очистки 0,5 М раствором NaOH примеси на смоле не обнаруживались независимо от способа пробоподготовки. В этом эксперименте образцы были сильно разбавлены перед анализом. В улучшенном методе образцы готовили после переноса на чашку для сбора, а разбавление образцов ограничивалось.

Сравнение образцов, приготовленных на фильтровальном планшете, с образцами, приготовленными на планшете для сбора. Искусственно загрязненный PreDictor MabSelect SuRe очищали с использованием: (1) PBS (20 мМ фосфата, 0.15 М NaCl, pH 7,4) (контроль 1), (2) Запатентованный раствор CIP, (3) 0,15 М фосфорная кислота, pH 1,6, (4) 6,0 М гидрохлорид гуанидина, (5) 0,1 М NaOH + 1,0 М NaCl, ( 6) 0,1 М NaOH, (7) 0,5 М NaOH, (8) PBS, без обрастания (контроль 2). Относительную концентрацию белка на смоле измеряли с помощью чип-электрофореза (n = 4, среднее значение ± стандартное отклонение).

Оценка возникновения перекрестного загрязнения между лунками при переносе смолы с помощью центрифугирования.

Для подготовки образцов для SDS-PAGE или электрофореза на чипах образцы смолы переносили из 96-луночного фильтрующего планшета в планшет для сбора.Первоначально для ручного переноса каждого образца смолы из лунок фильтрующего планшета в сборный планшет использовалась ложка. В усовершенствованном методе осушенную хроматографическую смолу быстро переносили с помощью центрифугирования. Это было достигнуто за счет точного размещения коллекционной пластины вверх дном на 96-луночной фильтровальной пластине. Два планшета скрепляли резиновыми лентами, переворачивали, и смолу в лунках переносили с фильтрующего планшета на сборный планшет с помощью центрифугирования.Во время разработки метода было подтверждено отсутствие перекрестного загрязнения между лунками во время переноса смолы с 96-луночного фильтрующего планшета на сборный планшет с использованием центрифугирования. Эта проверка проводилась путем окрашивания смолы MabSelect SuRe в каждой второй колонке в первой половине планшета и в каждом втором ряду во второй половине 96-луночного фильтровального планшета с использованием бромфенолового синего (вверху). После удаления жидкости осушенную смолу переносили на пластину для сбора с помощью центрифугирования.Визуальным осмотром можно было подтвердить, что среди неокрашенных частиц MabSelect SuRe не было обнаружено голубых частиц (нижняя часть). Таким образом, при использовании центрифугирования для переноса осушенной смолы с 96-луночного фильтрующего планшета на сборный планшет перекрестного загрязнения не произошло.

Оценка возникновения перекрестного загрязнения между лунками при переносе смолы с помощью центрифугирования. Смолу MabSelect SuRe в каждой второй колонке в первой половине планшета PreDictor и в каждом втором ряду во второй половине планшета PreDictor окрашивали бромфеноловым синим (вверху).После удаления жидкости осушенную смолу переносили на пластину для сбора с помощью центрифугирования (внизу).

Оценка воспроизводимости объемов смолы после переноса смолы для пробоподготовки.

Также была исследована воспроизводимость объема смолы после переноса на чашку для сбора. 96-луночный фильтровальный планшет, заполненный 20 мкл MabSelect SuRe, уравновешивали PBS перед переносом осушенной смолы на сборный планшет. Затем перенесенную смолу инкубировали в избыточном количестве чистого поликлонального IgG.IgG в растворе связывался с MabSelect SuRe. Поскольку это была закрытая система, количество связанного IgG равнялось разнице между исходным количеством IgG в растворе и количеством IgG в супернатанте. Предполагалось, что количество IgG, связанного со смолой, пропорционально объему смолы в лунках. Таким образом, стандартное отклонение оптической плотности (ОП) при 280 нм в супернатанте, т. е. несвязанного IgG, должно отражать воспроизводимость объема смолы между лунками. Этот метод показал относительное стандартное отклонение 2% между лунками.Этот результат можно сравнить с относительными стандартными отклонениями для объемов смолы пластин PreDictor, которые составляют порядка 1–5%. 3

Электрофорез на чипе для анализа остаточных белковых примесей после очистки MabSelect SuRe, загрязненного повторными циклами связывания-элюирования с жидкостью собранной клеточной культуры.

В улучшенной и окончательной версии высокопроизводительного метода разработки протоколов безразборной мойки для MabSelect SuRe смола в 96-луночных фильтровальных планшетах была загрязнена повторной загрузкой-элюированием с использованием HCCF [супернатант клеток яичника китайского хомячка (CHO)] с mAb и буферами, обычно используемыми в процессе. 6 Загрязняющий агент не добавлялся. Уравновешивание, применение сырья, промывание и элюирование повторяли десять раз, что соответствует десяти циклам хроматографии (1). Никакая очистка не была включена в эту процедуру загрязнения.

Схематическое описание загрязнения смолы MabSelect SuRe в планшетах PreDictor в результате повторяющихся циклов связывания-элюирования. Шаги 1 и 3 показывают уравновешивание или промывку PBS (20 мМ фосфата, 0,15 М NaCl, pH 7,4). На этапе 2 к смоле добавляли собранную культуральную жидкость с mAb и проводили инкубацию в течение 30 минут.На стадии 4 связанное mAb элюировали 0,1 М цитратом натрия, pH 3,5. Шаги 1–4 повторяли десять раз, что соответствует десяти циклам хроматографии. На каждом этапе осуществляли перемешивание, а между каждым этапом для удаления жидкости использовали центрифугирование.

Загрязненная смола была очищена с использованием отдельных этапов очистки или последовательностей нескольких этапов очистки (). Между каждой последовательной стадией очистки смолу промывали PBS, а затем промывали сверхчистой водой (). Остаточные белковые примеси на очищенной смоле измеряли с помощью чип-электрофореза (калипер).Чип-электрофорез был выбран из-за автоматизации и высокой пропускной способности аналитического метода. показаны примеры виртуального геля и соответствующих электроферограмм, сгенерированных программным обеспечением Caliper. Также можно было генерировать полуколичественные данные, что удобно при оценке сотен точек данных.

Электрофорезный анализ остаточных примесей на MabSelect SuRe после очистки. Программное обеспечение Caliper создает виртуальные пластинчатые гели (слева) и электрофореграммы (справа).Выделены дорожка низкой интенсивности в виртуальном геле и соответствующая электрофореграмма, представляющая наиболее эффективный протокол CIP на этом рисунке. Основной белковой примесью на загрязненной смоле MabSelect SuRe были mAb; молекулярный пик большого размера в B5, скорее всего, является невосстановленным антителом.

Таблица 1

Таблица 1

Тридцать два различных протокола очистки, включая один контрольный (промывка PBS), были оценены на эффективность очистки загрязненной смолы MabSelect SuRe этап 3 CIP этап 4 1 PBS, pH 7.4 (контроль) 2 0,1 М лимонной кислоты, рН 3,0 3 0,1 М рН лимонная кислота 2,5 4 6 M GUA-HCL 100 мм 1-тиоглицерина, PH 8.5

6 0,1 м Лимонная кислота PH 3.0 6 м Гуа- HCl 7 0.1 м Лимонная кислота pH 3.0 100 мм 1-тиоглицерин, pH 8.5 6 M GUA-HCL 8 0,1 м Лимонная кислота PH 3.0 100 мм 1-тиоглицерин, рН 8,5 6 m GUA-HCL 0,1 м Лимонная кислота PH 3.0 9 8 м У мочевины 8 м, 0,1 м Лимонная кислота, PH 3.0 6 10 900 8 м Уреа , 1 М NaCl, 0,1 М лимонная кислота, рН 3.0 11 100 мМ NaOH 12 0,1 М рН лимонной кислоты 3,0 100 мМ NaOH 13 0,1 M Лимонная кислота pH 2.5 100 мм NaOH 9137 100 мм NaOH 0,1 м Лимонная кислота PH 3.0 15 0.1 м Лимонная кислота PH 3.0 100 мм NaOH 0,1 м Лимонная кислота PH 3.0 6 16 8 м Уреа, 0,1 м Лимонная кислота, PH 3.0 100 мм NaOH 17 17 8 м Уреа, 1 м NaCl, 0,1 м Лимонная кислота, PH 3.0 100 мм NaOH 6 18 0,1 м Аскорбиновая кислота 100 мм NaOH 19 0.1 м Лимонная кислота pH 3.0 70% Ethanol 100 мм NaOH 0,1 м Лимонная кислота PH 3.0 30% ISOROPANOL 100 мм NaOH 21 0,5 м NaOH 0,1 м Лимонная кислота PH 3.0 0,5 м NaOH

23 0,1 м Лимонная кислота PH 3.0 0,3 м NaOH 100 мм 1-тиоглицерина, pH 8,5 * 100 мм NaOH

25 6 25 100 мм 1-тиоглицерин, PH 8.5 100 мм NAOH 8 26 100 мм NaOH 27 100 мм DTT, PH 8.5 100 мМ NaOH 28 0.1 м Лимонная кислота PH 3.0 100 мм 1-тиоглицерин, pH 8,5 100 мм NaOH 9 6 29 0,1 м Лимонная кислота PH 3.0 100 мм 1-тиоглицерин, рН 8,5 100 мм NaOH 0,1 м Лимонная кислота pH 3.0 100 мм 1-тиоглицерин, pH 8.5 0,5 м NaOH 31 0,1 м Лимонная кислота PH 3.0 100 мМ 1-тиоглицерина, рН 8.5 0,5 м NaOH 100 мм NaOH 100 мм 1-тиоглицерин, pH 8,5

Наравненные уровни примесных белков на MABSELECT наверняка смолы, измеренные чипом электрофореза после очистки по 32 протоколам CIP, представлены в . Количественный расчет всех пиков примесей, включая пики антител, и вычитание базовой линии выполнялись автоматически с помощью настроек программного обеспечения по умолчанию.

Оставшиеся примеси на загрязненной смоле MabSelect SuRe после очистки с использованием 32 различных протоколов, включая один контрольный (n = 3, среднее значение ± стандартное отклонение). Подробная информация о составе протоколов CIP находится в . Низкая концентрация белка на смоле соответствовала эффективной очистке и наоборот. Протокол CIP 11 — очистка 0,1 М раствором NaOH. В протоколах CIP 12–20 0,1 М NaOH сочетали с кислотными стадиями, растворителем, спиртом или хаотропными агентами. CIP 21–23 соответствует 0,3–0.5 М NaOH с/без кислотной очистки. В CIP 24–29 смолу очищали восстанавливающим агентом, а затем 0,1 М NaOH с кислотной очисткой или без нее, а в CIP 30 и 31 после восстановителя использовали 0,5 М NaOH. В CIP 32 использовался обратный порядок, т.е. 0,1 М NaOH, а затем 100 мМ 1-тиоглицерина.

Эффективная очистка MabSelect SuRe была достигнута с помощью 0,1 М NaOH (протокол CIP 11). Дальнейшее улучшение не наблюдалось, когда 0,1 М NaOH сочетали с кислотными стадиями, растворителем, спиртом или хаотропными агентами (протоколы CIP 12–20).Еще более эффективная очистка была достигнута с помощью 0,3–0,5 М NaOH (протоколы CIP 21–23) или восстановителя (50–100 мМ 1-тиоглицерина или 100 мМ DTT), а затем NaOH (протоколы CIP 24–31). Между образцами, очищенными 50 или 100 мМ 1-тиоглицерина, различий не наблюдалось. После очистки 100 мМ восстанавливающим агентом, а затем 0,5 М NaOH на смоле не было обнаружено никаких следов белковых примесей (CIP 30 и 31). Обратный порядок двух стадий: 0,1 М NaOH, за которым следует 100 мМ 1-тиоглицерина (протокол CIP 32), не показал улучшенной эффективности очистки по сравнению с 0.1 М NaOH. Последовательность 100 мМ 1-тиоглицерина с последующим добавлением 6 М гидрохлорида гуанидина также дала очень эффективную очистку (протоколы CIP 7 и 8). Только 100 мМ 1-тиоглицерина не показали никакого удаления белковых примесей (протокол CIP 5).

Обсуждение

Загрязнение хроматографической смолой 96-луночных фильтровальных планшетов.

При выполнении многочисленных последовательных циклов в режиме колонки на хроматографической смоле может постепенно накапливаться загрязняющие вещества, что приводит к загрязнению колонки.Планшеты PreDictor, 96-луночные фильтровальные планшеты, предварительно заполненные хроматографической смолой, предназначены для одноразового использования, а не для переработки. Следовательно, необходима процедура, которая ускорит засорение смолой 96-луночных фильтровальных планшетов, чтобы можно было использовать их для оценки условий очистки. В первоначальном методе оценки условий очистки было выполнено искусственное загрязнение смолы с использованием лизата E. coli с добавлением поликлонального IgG и раствора для осаждения, состоящего из 2.9 М сульфат аммония, 0,6 М фосфорная кислота, рН 2,5. Был использован лизат E. coli , поскольку он имеет более высокое содержание белков клетки-хозяина (БКХ) по сравнению с супернатантами клеток млекопитающих. В соответствии с предыдущими неопубликованными исследованиями (личное сообщение, Малин Эрикссон, GE Healthcare) для усиления и ускорения загрязнения использовали раствор для осаждения. Искусственное загрязнение привело к большому количеству белковых примесей на смоле ( и ). Используя этот метод, можно было различать эффективность очистки различных химикатов CIP при удалении осажденных белков.Однако при выборе процедуры CIP для конкретного процесса желательно использовать представляющий интерес исходный материал, т. е. супернатант культуры клеток млекопитающих с mAb для смолы с белком А и буферными компонентами, которые включены в процесс, вместо модельной системы. и нетипичные химические вещества.

В улучшенной и окончательной версии высокопроизводительного метода разработки протоколов CIP для хроматографических смол 96-луночные фильтровальные планшеты загрязняли супернатантом клеток CHO с mAb путем повторных циклов загрузки-элюирования.Количество циклов загрузки-элюирования, которое требовалось для загрязнения смолы, не было полностью изучено. Однако при использовании супернатанта клеток СНО десять циклов загрузки-элюирования приводили к загрязнению смолы. Условия безразборной мойки для MabSelect SuRe описаны здесь, но этот метод можно использовать для скрининга условий очистки для других комбинаций хроматографических смол и исходных материалов. Возможно, что корма другого происхождения и целевые белки требуют другого количества циклов загрузки-элюирования, чтобы хроматографическая смола была достаточно загрязнена для скрининга условий CIP.

Подготовка проб.

После загрязнения и очистки смолы в 96-луночных фильтровальных планшетах с помощью электрофореза анализировали остаточные белковые примеси на смоле. Сравнивали два разных режима пробоподготовки. Один подход заключался в подготовке образцов в 96-луночном фильтровальном планшете, где смола была загрязнена и очищена. Другой подход заключался в переносе осушенной смолы на чашку для сбора перед подготовкой образца. Несмотря на то, что в целом относительная концентрация примесей была одинаковой для обоих способов подготовки образцов, образцы, приготовленные в 96-луночном фильтровальном планшете, давали более высокие концентрации примесей по сравнению с образцами, приготовленными в собирающем планшете.Это было наиболее значимо для наименее эффективных протоколов CIP. Одним из объяснений может быть то, что белки, которые осаждались/связывались с фильтром и пластиковой поверхностью фильтрующей пластины во время загрязнения, высвобождались, когда надосадочная жидкость удалялась через фильтр после подготовки образца. Вместо этого при переносе образцов смолы с фильтрующей пластины на сборную пластину перед подготовкой образцов эти белки останутся захваченными в фильтровальной пластине. Таким образом, последний метод позволяет анализировать исключительно примеси, связанные с хроматографической смолой, что является предпочтительным.Образцы в этой части исследования были сильно разбавлены перед анализом с помощью чип-электрофореза. В последнем методе к образцам смолы объемом 50 или 20 мкл добавляли 100 мкл буфера для образцов. Затем супернатант извлекали и анализировали без дальнейшего разбавления. Более концентрированные образцы, т. е. более высокие уровни примесей, упростили различение наиболее эффективных протоколов CIP.

В начале разработки метода небольшой инструмент (ложка) использовался для ручного переноса осушенной смолы из 96-луночного фильтровального планшета во флакон для подготовки проб.Этот метод был утомительным, трудоемким и не очень точным. Воспроизводимость и высокая производительность были необходимы при улучшении метода переноса смолы с 96-луночного фильтрующего планшета перед подготовкой образца. Усовершенствованный метод включал перенос смолы с 96-луночного фильтрующего планшета на сборный планшет с использованием центрифугирования. Этот метод оказался надежным и быстрым с высокой воспроизводимостью и отсутствием перекрестного загрязнения между лунками.

Скрининг и оптимизация CIP.

Условия очистки проверялись путем инкубации загрязненной смолы в различных CIP-агентах.В этой статье для смолы MabSelect SuRe, полученной из белка А, использовалось время инкубации 15 минут. Это время инкубации соответствует времени контакта CIP в колонке; для смол с протеином А обычно 15 мин. Для других комбинаций смол и кормов может потребоваться другое время контакта. После определения перспективных химических веществ CIP процедура CIP может быть дополнительно оптимизирована путем изучения различных химических концентраций и времени контакта с использованием 96-луночных фильтровальных планшетов. Если последовательность определена как многообещающий кандидат CIP, ее следует оценивать, исключая промывки между этапами CIP, чтобы программа обслуживания колонки была как можно короче.

Проверка колонки.

Механизм и массообмен загрязнения и очистки будут отличаться в периодическом формате по сравнению с колоночным форматом. Поэтому важно проверять полученные результаты с помощью колоночной хроматографии, уделяя особое внимание материалу верхней части колонки, степень загрязнения которого различна по сравнению с нижней частью. Обычно это делается в уменьшенной модели предполагаемого масштаба производства. Несколько исследований доказали хорошую корреляцию между уменьшенным 96-луночным форматом и традиционными колонками. 6 9 Для MabSelect SuRe безразборная мойка с использованием 0,1 М NaOH при времени контакта 15 минут обеспечивает эффективную очистку в процессе mAb и позволяет использовать колонку в течение не менее 150 циклов. 6 Для более сложных кормов можно использовать двухэтапный протокол безразборной мойки с использованием 100 мМ восстанавливающего агента, а затем 0,1 М NaOH на MabSelect SuRe. 7 MabSelect, основанный на рекомбинантном белке А, который менее стабилен в щелочных условиях по сравнению с MabSelect SuRe, выигрывает от двухэтапного протокола CIP с использованием 100 мМ восстанавливающего агента, а затем 15 мМ NaOH. 8 , 9

Ручной или автоматический рабочий процесс.

Загрязнение смолой и проверка условий очистки могут выполняться вручную с использованием мультипипеток и ручного центрифугирования или вакуумной фильтрации. Процедура также была реализована на полностью автоматизированной роботизированной системе, такой как Tecan™. Работая вручную, загрязнение смолы с помощью десяти последовательных циклов загрузки-элюирования потребовало двух рабочих дней. С помощью робота Tecan десять циклов можно выполнить за ночь.Скрининг условий CIP выполняется за половину рабочего дня, как и анализ остаточных белковых примесей с использованием чип-электрофореза.

Таким образом, высокопроизводительный метод скрининга условий безразборной мойки для хроматографических смол был разработан для удовлетворения растущего спроса на сокращение времени и стоимости разработки процесса в биофармацевтической промышленности. Метод включает загрязнение смолы в 96-луночных фильтровальных планшетах с использованием HCCF, очистку путем инкубации загрязненной смолы в химикатах CIP и, наконец, анализ остаточных белковых примесей на смоле после очистки.

Первоначально использовалась модельная подача и ускоренное загрязнение хроматографической смолы осуществлялось путем добавления осадительного раствора (кислота/соль). После ручной и утомительной пробоподготовки был проведен анализ с использованием SDS-PAGE.

Метод постепенно улучшался с точки зрения воспроизводимости, производительности и автоматизации. В модернизированном методе использовались HCCF с mAb и компоненты буфера, включенные в конкретный процесс. Смола для хроматографии была загрязнена десятью повторными циклами связывания-элюирования.Производительность и воспроизводимость во время пробоподготовки также были улучшены. Кроме того, чип-электрофорез для анализа остаточных примесей на смоле после очистки позволил количественно определить белковые примеси с высокой производительностью и автоматизацией. Интересно также отметить, что как в лизате E. coli , так и в системе культивирования клеток СНО основная причина обрастания, определенная с помощью SDS-PAGE или электрофореза на чипах, была связана с продуктом.

Этот метод использовался для скрининга многочисленных химических веществ CIP и последовательностей этапов CIP для MabSelect SuRe в процессе mAb.Было установлено, что одноэтапная процедура CIP с использованием 0,1 М NaOH при времени контакта 15 минут эффективно очищает смолу MabSelect SuRe. Для более сложных исходных материалов и для обычных смол с протеином А, которые менее стабильны в щелочных условиях, можно использовать двухэтапные протоколы безразборной мойки с использованием восстанавливающего агента, а затем NaOH.

Материалы и методы

Искусственное загрязнение хроматографической смолы.

Планшет PreDictor MabSelect SuRe, 50 мкл (кодовый номер 28-9258-25, GE Healthcare, Швеция) вскрывали в соответствии с инструкциями производителя. 10 Раствор для хранения (20% этанол) удаляли и смолу уравновешивали с использованием 200 мкл PBS (20 мМ фосфата, 0,15 М NaCl, pH 7,4) x3. Дно планшета было покрыто пленкой Microseal ® ‘F’ (номер продукта MSF1001, Bio-Rad Laboratories, США) перед добавлением растворов корм/CIP, чтобы избежать утечки жидкости из планшетов во время инкубации. Позже было обнаружено, что утечки из планшетов можно избежать, тщательно промокнув дно планшетов PreDictor мягкой бумажной салфеткой, чтобы удалить капли перед добавлением новой жидкости, и избегая прямого контакта между выходными отверстиями планшетов PreDictor и какой-либо поверхностью. Планшет PreDictor на планшете для сбора на протяжении всего эксперимента. 3 , 10

E. coli [BL21 (DE3) дикого типа] гомогенизировали под высоким давлением. Затем лизат центрифугировали, а затем надосадочную жидкость фильтровали через фильтр с размером пор 0,45 мкм для получения осветленного раствора, а затем рН доводили до 7,3. К смоле в лунки добавляли по 200 мкл осветленного лизата E. coli , обогащенного поликлональными IgG, Gammanorm (номер продукта 008565, Octapharma, Швеция) до концентрации 3 мг/мл.В некоторые лунки, используемые в качестве контроля, вместо лизата E. coli добавляли 200 мкл PBS (20 мМ фосфата, 0,15 М NaCl, pH 7,4). Верх планшета PreDictor был покрыт пленкой Microseal ‘F’, и инкубация проводилась в течение 45 минут на шейкере для микропланшетов (MTS 2/4 digital, IKA, Германия, круговое центростремительное движение 3 мм) при 1100 об/мин. После инкубации несвязавшуюся фракцию удаляли. Загрузку 200 мкл очищенного лизата E. coli с добавлением IgG повторяли всего четыре раза.После последней инкубации смолу промывали 200 мкл PBS. Дно планшета PreDictor было покрыто пленкой Microseal «F» и к смоле было добавлено 200 мкл осадительного раствора (2,9 М сульфата аммония, 0,6 М фосфорной кислоты, рН 2,5). Верх планшета покрывали пленкой Microseal «F» и инкубировали при 1100 об/мин в течение ночи (приблизительно 17 ч). После последующей промывки 200 мкл PBS и элюирования 200 мкл 0,1 М цитрата натрия, pH 3,0 x3, смолу повторно уравновешивали 200 мкл PBS x3 и промывали 200 мкл сверхчистой воды x3.На всех этапах, описанных выше, для добавления образца и буфера в планшет использовали 8-канальную мультипипетку. Центрифугирование при 500xg в течение 1 минуты (Centrifuge 5810 R с ротором A-2-DWP, Eppendorf, Германия) проводили для удаления жидкости из планшетов. Жидкие фракции собирали в 96-луночные планшеты для сбора (аналитический блок 0,5 мл, V-образное дно, номер продукта 3957 Costar ® , Corning Incorporated, USA) и выбрасывали. Затем загрязненную смолу использовали для оценки условий безразборной мойки.

Загрязнение повторными циклами связывания-элюирования.

Планшет PreDictor MabSelect SuRe, 20 мкл (кодовый номер 28-9258-24, GE Healthcare, Швеция) был открыт в соответствии с инструкциями производителя. 10 Раствор для хранения (20% этанол) удаляли и смолу уравновешивали с использованием 200 мкл PBS (20 мМ фосфата, 0,15 М NaCl, pH 7,4) x3. Дно планшета промокали мягкой бумажной салфеткой и помещали на пустой 96-луночный планшет для сбора на 500 мкл с V-образным дном (код № 28-4039-43, GE Healthcare, Швеция). 300 мкл супернатанта клеток CHO с mAb (1.В лунки вносили 1 мг/мл) (GE Healthcare, Швеция). Верх планшета PreDictor был покрыт фольгой для микропланшетов (96-луночный) (код № BR-1005-78, GE Healthcare, Швеция). Планшет PreDictor, помещенный на планшет для сбора, закрепляли резиновыми лентами на шейкере для микропланшетов (MTS 2/4 digital, IKA, Германия, круговое центростремительное движение 3 мм) и проводили инкубацию в течение 30 мин при 1100 об/мин. После промывки после загрузки 200 мкл PBS связанное mAb элюировали 200 мкл 0,1 М цитрата натрия, pH 3.5 x 2. На каждом этапе, описанном выше, кратковременно перемешивали при 1100 об/мин на шейкере для микропланшетов и центрифугировали при 500xg в течение 1 минуты (центрифуга 5810 R с ротором A-2-DWP, Eppendorf, Германия) для удаления жидкости из плита. Жидкие фракции собирали в планшеты для сбора (96-луночные, 500 мкл, V-образное дно; код № 28-4039-43, GE Healthcare, Швеция) и отбрасывали. Уравновешивание, применение корма, промывание и элюирование повторяли в общей сложности десять раз (1). Процедура была выполнена вручную за два рабочих дня.После цикла 5 th смолу в планшете PreDictor хранили в течение ночи в 200 мкл PBS при 5°C. Верх планшета PreDictor был покрыт фольгой для микропланшетов (96-луночный) (код № BR-1005-78, GE Healthcare, Швеция), а дно планшета покрыто пленкой Microseal ‘F’ (номер продукта MSF1001, Bio-Rad Laboratories, США) при хранении. На следующий день выполняли циклы 6–10. После последнего цикла смолу в лунках промывали 200 мкл сверхчистой воды и хранили в 200 мкл сверхчистой воды до использования для скрининга условий CIP.Верх планшета PreDictor был покрыт фольгой для микропланшетов (96-луночный) (код № BR-1005-78, GE Healthcare, Швеция), а дно планшета покрыто пленкой Microseal ‘F’ (номер продукта 132097, Bio-Rad Laboratories, США) при хранении.

Проверка условий безразборной мойки.

Загрязненную смолу в планшете PreDictor промывали 200 мкл сверхчистой воды x2. Дно планшета PreDictor промокли мягкой бумажной салфеткой и планшет поместили на 96-луночный планшет для сбора данных объемом 500 мкл с V-образным дном (код №28-4039-43, GE Healthcare, Швеция). В лунки добавляли 300 мкл растворов CIP, а верхнюю часть планшета-предиктора покрывали фольгой для микропланшета (96-луночный) (код № BR-1005-78, GE Healthcare, Швеция). Планшет PreDictor, помещенный на планшет для сбора, закрепляли резиновыми лентами на шейкере для микропланшетов (MTS 2/4 digital, IKA, Германия, круговое центростремительное движение 3 мм) и проводили инкубацию в течение 15 мин при 1100 об/мин. Добавляли 300 мкл PBS (20 мМ фосфата, 0,15 М NaCl, pH 7,4) с последующей промывкой 300 мкл сверхчистой воды.Эта процедура (инкубация в растворах CIP и промывках) повторялась в общей сложности до четырех раз в зависимости от количества этапов CIP в последовательности. После последней стадии CIP загрязненную и очищенную смолу в лунках промывали 300 мкл PBS x3, а затем промывали 300 мкл сверхчистой воды x3 (). На каждом этапе кратковременно перемешивали при 1100 об/мин на шейкере для микропланшетов и центрифугировали при 500xg в течение 1 мин (центрифуга 5810 R с ротором A-2-DWP, Eppendorf, Германия) для удаления жидкости из планшета.Жидкие фракции собирали в планшеты для сбора (96-луночные, 500 мкл, V-образное дно; код № 28-4039-43, GE Healthcare, Швеция) и отбрасывали.

Протоколы CIP для очистки искусственно загрязненного MabSelect SuRe.

Искусственно загрязненный PreDictor MabSelect SuRe, 50 мкл (кодовый номер 28-9258-25, GE Healthcare, Швеция) очищали с помощью: (1) промывали PBS (20 мМ фосфат, 0,15 М NaCl, pH 7,4, контроль 1). , (2) 0,1 М NaOH, (3) 0,2 М NaOH, (4) 0,5 М NaOH, (5) 0,1 М NaOH + 30% 2-пропанол, (6) Коммерческое бытовое моющее средство (Да, Procter & Gamble) разбавлен до 0.1% об./об. с водой, (7) 0,1 М NaOH + 1,0 М NaCl, (8) 0,1 М NaOH, затем 0,1 М цитрата, (9) 0,1% коммерческое бытовое моющее средство, затем 0,1 М NaOH и (10) Нет загрязнения (контроль 2). Анализ остаточных белковых примесей после искусственного загрязнения и очистки проводили с помощью SDS-PAGE.

Протоколы CIP для сравнения подготовки проб в планшетах PreDictor и планшетах для сбора.

Искусственно загрязненный PreDictor MabSelect SuRe, 50 мкл (кодовый номер 28-9258-25, GE Healthcare, Швеция) очищали с использованием: (1) PBS (20 мМ фосфата, 0.15 М NaCl, pH 7,4) (контроль 1), (2) Запатентованный раствор CIP, (3) 0,15 М фосфорная кислота, pH 1,6, (4) 6,0 М гидрохлорид гуанидина, (5) 0,1 М NaOH + 1,0 М NaCl, ( 6) 0,1 М NaOH, (7) 0,5 М NaOH, (8) PBS, отсутствие обрастания (контроль 2), четыре повтора для каждого условия. Подготовку образцов проводили непосредственно в чашке PreDictor или после переноса в чашку для сбора. Образцы в этом исследовании были сильно разбавлены перед анализом методом электрофореза чипа. К 50 мкл смолы добавляли первые 200 мкл буфера для образцов.После термообработки образца объем 2 мкл супернатанта был дополнительно разбавлен в 22 раза (2:44) перед анализом остаточных белковых примесей после обрастания и очистки с помощью чип-электрофореза.

Протоколы CIP для очистки MabSelect SuRe, загрязненного повторными циклами связывания-элюирования с супернатантом клеток CHO с mAb.

PreDictor MabSelect SuRe, 20 мкл (кодовый номер 28-9258-24, GE Healthcare, Швеция), загрязненный повторными циклами связывания-элюирования с использованием супернатанта клеток CHO с mAb, очищали с помощью 32 различных протоколов CIP, включая 1–4 этапа CIP () .Растворы для CIP готовили и распределяли в планшетах с глубокими лунками Microplate 48 Deep well, 5 мл/лунку (номер продукта 360002, Seahorse Bioscience, North Billerica, MA) в соответствии со схемой экспериментального планшета. Протоколы запускали в трех повторностях и анализировали на наличие остаточных белковых примесей с использованием чип-электрофореза, как описано ниже.

Перенос загрязненной и очищенной смолы с планшета PreDictor на сборный планшет с помощью центрифугирования.

Жидкость удаляли из планшета PreDictor с помощью центрифугирования при 500xg в течение 1 мин.Планшет для сбора очень точно помещали вверх дном на планшет PreDictor. Две пластины были скреплены резиновыми лентами. Планшеты переворачивали и осушенную смолу в лунках переносили с фильтрующего планшета на сборный планшет с помощью центрифугирования (центрифуга Avanti J-20 XP с ротором JS-5.3, Beckman Coulter, Бреа, Калифорния, США) при 972x g в течение 5 мин. .

Сравнение пробоподготовки в планшете PreDictor и пробоподготовки в чашке для сбора.

Смола в двух планшетах Predictor MabSelect SuRe по 50 мкл (код №.28-9258-25, GE Healthcare, Швеция) был искусственно загрязнен, как описано выше. Некоторые лунки использовали в качестве контроля, и вместо питания в эти лунки добавляли буфер PBS (20 мМ фосфат, 0,15 М NaCl, pH 7,4). Шесть модельных растворов CIP согласно приведенному выше описанию использовали для сравнения двух режимов подготовки образцов. Образец буфера для электрофореза чипов готовили путем растворения 3 г триса в 40 мл сверхчистой воды. pH доводили до 7,5 ледяной уксусной кислотой. Конечный объем доводили до 50 мл добавлением сверхчистой воды.0,5 г SDS растворяли в 5 мл трис-буфера и доводили объем до 50 мл добавлением сверхчистой воды. Буфер для образца готовили путем смешивания 25 мл SDS-буфера и 1,39 мл 1 М DTT, а объем доводили до 50 мл, добавляя сверхчистую воду. Для одного из загрязненных и очищенных планшетов PreDictor осушенные образцы смолы переносили на сборный планшет с помощью центрифугирования, как описано выше. Жидкость сливали из другого планшета PreDictor с помощью центрифугирования при 500xg в течение 1 мин.Нижняя часть планшета PreDictor была покрыта пленкой Microseal F (номер продукта MSF1001, Bio-Rad Laboratories, США). 200 мкл SDS/DTT, содержащего буфер для образцов для электрофореза чипов, добавляли к осушенным образцам смолы в планшете PreDictor и в планшете для сбора. Сверху планшеты покрывали пленкой Microseal ‘F’, и смолу инкубировали в буфере для образцов в течение 15 минут на шейкере для микропланшетов (MTS 2/4 digital, IKA, Германия, круговое центростремительное движение 3 мм) при 1100 об/мин, а затем нагревают в термокамере при 104°С в течение 5 мин.Фольгу микропланшета удаляли с планшета PreDictor, а супернатант собирали в планшет для сбора с помощью центрифугирования при 500xg в течение 1 мин. В другом режиме пробоподготовки планшет для сбора образцов с образцами, подвергнутыми термообработке в SDS/DTT, снова быстро перемешивали при 1100 об/мин, а затем планшет центрифугировали при 500xg в течение 2 мин для уменьшения скорости вращения хроматографической смолы. Супернатанты из планшета PreDictor и планшета для сбора дополнительно разбавляли 2:44 перед анализом с помощью чип-электрофореза.

Исследование перекрестного загрязнения при переносе смолы с планшета PreDictor на планшет для сбора с помощью центрифугирования.

Планшет PreDictor MabSelect SuRe на 50 мкл (код № 28-9258-25, GE Healthcare, Швеция) вскрывали в соответствии с инструкциями производителя. 10 Раствор для хранения (20% этанола) удаляли с планшета PreDictor с помощью центрифугирования (центрифуга Avanti J-20 XP с ротором JS-5.3, Beckman Coulter, Бреа, Калифорния) при 500 g в течение 1 мин.Смолу в планшете уравновешивали 200 мкл PBS (20 мМ фосфата, 0,15 М NaCl, pH 7,4) x3. Между каждым этапом уравновешивания жидкость удаляли центрифугированием при 500xg в течение 1 мин. В лунки в каждую вторую колонку в первой половине планшета PreDictor и в каждый второй ряд во второй половине планшета PreDictor вносили по 200 мкл растворенного в воде бромфенолового синего. Планшет инкубировали на шейкере для микропланшетов (MTS 2/4 digital, IKA, Германия, круговое центростремительное движение 3 мм) при 750 об/мин в течение 60 мин.После удаления раствора бромфенола центрифугированием при 500xg в течение 1 мин осушенную смолу MabSelect SuRe переносили с планшета PreDictor на планшет для сбора с помощью центрифугирования. Планшет для сбора осматривали визуально на наличие окрашенных частиц среди неокрашенных.

Исследование воспроизводимости при переносе смолы с планшета PreDictor на планшет для сбора с помощью центрифугирования.

Планшет PreDictor MabSelect SuRe на 20 мкл (кодовый номер 28-9258-24, GE Healthcare, Швеция) был открыт в соответствии с инструкциями производителя. 10 Раствор для хранения (20% этанола) удаляли с планшета PreDictor с помощью центрифугирования (центрифуга Avanti J-20 XP с ротором JS-5.3, Beckman Coulter, Бреа, Калифорния) при 500 g в течение 1 мин. Смолу в планшете уравновешивали 200 мкл PBS (20 мМ фосфата, 0,15 М NaCl, pH 7,4) x3. Между каждым этапом уравновешивания жидкость удаляли центрифугированием при 500xg в течение 1 мин. Смолу переносили на пластину для сбора с помощью центрифугирования. 250 мкл поликлонального IgG Gammanorm (номер продукта 008565, Octapharma, Швеция), разбавленного до концентрации 3.К смоле в чашке для сбора добавляли 3 мг/мл PBS и проводили инкубацию в течение 60 мин при 300 об/мин на шейкере для микропланшетов (MTS 2/4 digital, IKA, Германия, круговое центростремительное движение 3 мм). После инкубации 100 мкл супернатанта переносили на УФ-считываемый планшет для анализа на ОП при 280 нм. Рассчитывали стандартное отклонение для оптической плотности при 280 нм.

Паспорт безопасности.

Искусственно загрязненные и очищенные образцы смолы переносили в пробирки Эппендорф на 500 мкл с помощью маленькой ложки (номер продукта 149940-4, WWR, США).Между каждым образцом ложку промывали 20% этанолом. К каждому образцу добавляли 20 мкл буфера для образцов Novex Tris-Glycine SDS (LC2676, Invitrogen, США) и 2 мкл 1 М DTT. Образцы подвергали термообработке в течение 3 мин при 95°С. Образцы (суспензия смолы) были смешаны перед тем, как 10 мкл каждого образца суспензии (как смолы, так и жидкости) были загружены в лунки геля Novex 8–16% Tris-Glycine (EC6045BOX, Invitrogen), помещенного в держатель MiniVE (GE Healthcare). , Швеция). Электрофорез проводили с использованием 0,25 М Трис, 0.19 M глицин, 0,1% SDS в качестве рабочего буфера при следующих условиях: 100 В, 400 мА в течение 2,10 часов. Гель окрашивали с помощью набора для окрашивания Deep Purple™ Total Protein (RPN0306, GE Healthcare, Швеция) в соответствии с инструкциями производителя и сканировали гель с помощью Typhoon 9410 (GE Healthcare, Швеция) с разрешением 100–200 мкм.

Электрофорез на чипах.

Буфер для образцов для электрофореза чипов готовили путем растворения 3 г Трис в 40 мл сверхчистой воды. рН доводят до 7.5 с ледяной уксусной кислотой. Конечный объем доводили до 50 мл добавлением сверхчистой воды. 0,5 г SDS растворяли в 5 мл трис-буфера и доводили объем до 50 мл добавлением сверхчистой воды. Буфер для образца готовили путем смешивания 25 мл SDS-буфера и 1,39 мл 1 М DTT, а объем доводили до 50 мл, добавляя сверхчистую воду.

Загрязненную, очищенную и осушенную смолу MabSelect SuRe из планшета PreDictor перенесли в 96-луночный планшет для сбора на 500 мкл с V-образным дном (код №28-4039-43, GE Healthcare, Швеция) с использованием центрифугирования, как описано выше. 100 мкл буфера для образцов, содержащего SDS/DTT, добавляли к смоле в каждую лунку планшета для сбора. Планшет покрывали пленкой Microseal ‘F’ (номер продукта MSF1001, Bio-Rad Laboratories, USA) и быстро перемешивали при 1100 об/мин на шейкере для микропланшетов (MTS 2/4 digital, IKA, Германия, круговое центростремительное движение 3 мм) перед нагревание пластины в термокамере при 104°С в течение 5 мин.

Related Post

2022 © Все права защищены.